[發(fā)明專利]基于核酸技術(shù)的生物體內(nèi)生理活性小分子的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610065869.3
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105651751A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏輝;程翰俊
• 申請（專利權(quán)）人: 南京大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.一種含有核酸的檢測溶液，其特征在于，該檢測溶液中包括有富含鳥嘌呤的核酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有核酸的檢測溶液，其特征在于，該檢測溶液包含天然DNA或RNA，以及其磷酸骨架經(jīng)過修飾的核酸和具有非天然堿基的核酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有核酸的檢測溶液，其特征在于，該核酸在一定條件下形成正平行DNA四鏈體結(jié)構(gòu)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含有核酸的檢測溶液，其特征在于，所述核酸的核苷酸序列為5’-GTGGGTAGGGCGGGTTGG-3’。

5.一種基于核酸技術(shù)的生物體內(nèi)生理活性小分子的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）特定序列核酸制備：利用固相合成技術(shù)制備所設(shè)計的單鏈核酸，經(jīng)分離純化后得到權(quán)利要求1所述的特定序列的核酸；

2）配制核酸儲備液：配制適合pH值及化學(xué)組分的緩沖溶液即TE緩沖液待用；取一定量核酸溶于該緩沖液中得到核酸儲備液；

3）配制核酸四鏈體檢測液：取一定量核酸儲備液，向其中加入一定量的KCl并用緩沖液稀釋，經(jīng)加熱退火后得到核酸四鏈體檢測液；

4）生理活性小分子檢測：將步驟3）中的核酸四鏈體檢測液與含有待測生理活性小分子的樣品以適當(dāng)體積比混合后孵育反應(yīng)，然后通過合理的檢測手段得到該生物識別過程中的輸出信號并由此計算得到待測生理活性小分子的濃度值。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于核酸技術(shù)的生物體內(nèi)生理活性小分子的檢測方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

1）DNA制備：利用PCR反應(yīng)制備所設(shè)計的DNA，經(jīng)凝膠電泳分離，純化后得到特定序列的DNA片段；

2）配制DNA儲備液：配制pH為7.0，含有2.5mMEDTA的50mMTris-HCl緩沖溶液即TE緩沖溶液待用；取一定量步驟1）中的DNA片段溶于該TE緩沖液中，配制濃度為400μM的DNA儲備液；

3）配制正平行DNA四鏈體檢測液：取一定量DNA儲備液，向其中加入一定量的KCl并用TE緩沖液稀釋，最終溶液中含有DNA濃度為20μM，K⁺濃度為200mM；將該溶液置于90℃下水浴加熱10min后緩慢降溫至室溫，然后避光保存待用；

4）生理活性小分子檢測：將步驟3）中的正平行DNA四鏈體檢測液與含有生理活性小分子的樣品以1:1的體積比混合后置于37oC環(huán)境中避光反應(yīng)2h，然后檢測所得樣品中的熒光信號，根據(jù)樣品中的熒光強(qiáng)度的即可得到生理活性小分子的濃度值。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種基于核酸技術(shù)的生物體內(nèi)生理活性小分子的檢測方法，其特征在于，所述生理活性小分子為原卟啉。