[發明專利]RNA甲基化測序文庫的構建方法在審
| 申請號： | 201610065846.2 | 申請日： | 2016-01-29 |
| 公開（公告）號： | CN105603536A | 公開（公告）日： | 2016-05-25 |
| 發明（設計）人： | 鄧臘梅;朱海浩;李明洲;宋彬彬;齊鑫 | 申請（專利權）人： | 北京諾禾致源生物信息科技有限公司 |
| 主分類號： | C40B50/06 | 分類號： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240 | 代理人： | 趙囡囡;吳貴明 |
| 地址： | 102200 北京市昌平區*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | rna 甲基化 序文 構建 方法 | ||
1.一種RNA甲基化測序文庫的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括：
步驟S1，對RNA樣品進行片段化，得到片段化RNA；
步驟S2，利用RNA甲基化特異性抗體對所述片段化RNA進行免疫共沉淀，得到沉淀物；
步驟S3，利用蛋白酶對所述沉淀物進行消化，得到消化物；
步驟S4，從所述消化物中提取RNA并對提取的RNA進行逆轉錄，得到cDNA；以及
步驟S5，利用所述cDNA進行測序文庫構建，得到所述RNA甲基化測序文庫。
2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述蛋白酶選擇蛋白酶K、木瓜蛋白酶 或者胃蛋白酶。
3.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述步驟S1中，采用化學法對所述RNA 進行片段化，得到所述片段化RNA。
4.根據權利要求3所述的構建方法，其特征在于，所述片段化RNA的長度為50～200nt。
5.根據權利要求3或4中任一項所述的構建方法，其特征在于，采用含Zn2+的鹽溶液對所 述RNA進行片段化。
6.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于，所述含Zn2+的鹽溶液中Zn2+的摩爾濃度 為5～10mol/L。
7.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述RNA甲基化特異性抗體為特異識 別RNA中m7G、Nm、m5C、m6A以及m6Am中任一種甲基化的抗體。
8.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，在所述步驟S4中，從所述消化物中提 取RNA的步驟包括采用trizol和氯仿對所述消化物進行抽提，得到上清RNA的步驟。
9.根據權利要求8所述的構建方法，其特征在于，所述trizol和氯仿的體積比為4～6： 1。
10.根據權利要求8所述的構建方法，其特征在于，從所述消化物中提取RNA的步驟在得 到所述上清RNA的步驟后，還包括：用醋酸鈉和異丙醇對所述上清RNA進行沉淀過夜，得到所 述提取的RNA。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于北京諾禾致源生物信息科技有限公司，未經北京諾禾致源生物信息科技有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201610065846.2/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
- 上一篇：彩色滌綸絲噴絲板
- 下一篇：構建DNA文庫的試劑盒和方法
