[發明專利]烈性傳染病病原體檢測引物組及試劑盒

有效

• 申請號: 201610065551.5
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105483293B
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 郝榮章;宋宏彬;盧曉;劉超;賈雷立;趙榮濤;王瑞麗;王金艷;李楊;孔文
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍疾病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 孫艷敏;徐麗維

本發明公開了烈性傳染病病原體檢測引物組及試劑盒，引物組包括埃博拉病毒、拉薩熱病毒、馬爾堡病毒、裂谷熱病毒、黃熱病毒和基孔肯雅熱病毒中的至少一組RT?LAMP引物。本發明的引物體系，減少了擴增反應背景，靈敏度和特異性都非常好。由引物組構成的試劑盒，還包括檢測液和微流控芯片，檢測液體系省略了單獨的RT?PCR的二次擴增步驟，縮短了檢測時間，且沒有核酸的變復性過程，減少了RNA酶和擴增核酸的污染機會，提高了檢測的敏感性和安全性。微流控芯片系統提供的等溫封閉環境，最終實現提取核酸模板的快速等溫擴增及自動化結果判別，降低了對實驗硬件的要求，減少了反應試劑用量，降低了檢測成本，結果可直接通過顏色變化判定。

技術領域

本發明涉及烈性傳染病病原體檢測技術領域，特別是烈性傳染病病原體檢測引物組及試劑盒。

背景技術

2014年西非地區爆發了有史以來最為嚴重的埃博拉疫情，并第一次走出非洲，擴散至歐美等發達國家，造成11000多人死亡。中非友誼源遠流長，經濟貿易和文化交流頻繁密切，因此，埃博拉疫情輸入的風險很大。疫情發生后，中國政府不僅第一時間向非洲國家提供了大量物資和技術援助，還專門派出了醫療衛生專家，組成檢測隊和醫療隊幫助當地對抗埃博拉疫情。

拉薩熱(Lassa fever)是發生在西非的一種病程1-4周的人畜共通疾病。其病源體為拉薩熱病毒，因治療難度和傳染性被列為生物安全第四級(Biosafety Level 4)病毒。此病毒為一種屬于沙粒病毒科的單鏈核糖核酸(RNA)病毒。在幾內亞、利比里亞、塞拉利昂和尼日利亞部分地區流行，但在其它西非國家也可能存在。

馬爾堡出血熱(Marburg hemorrhagic fever)是由來自與引起埃博拉出血熱的病毒同一科的一種病毒即馬爾堡病毒引起的嚴重高致命性疾病。這些病毒屬于已知感染人的最烈性病原體。

裂谷熱(rift valley fever)是由裂谷熱病毒引起的，經蚊類媒介或接觸傳播的急性病毒性感染病。臨床上以發熱、頭痛、肌痛、衰竭、畏光及白細胞減少為特征。

黃熱病(yellow fever)是黃熱病毒所致的急性傳染病，主要經伊蚊傳播。重型患者有發熱、黃疸和蛋白尿等。主要媒介在城市是埃及伊蚊，在農村為趨血蚊和非洲伊蚊，傳播途徑是經蚊的叮咬。

基孔肯雅熱是由基孔肯雅病毒(CHIKV，為單股RNA病毒)引起，經伊蚊傳播，以發熱、皮疹及關節疼痛為主要特征的急性傳染病。

發展針對埃博拉病毒等多種烈性傳染病病原的快速檢測技術是及時發現傳染源，實施及時有效隔離和對癥治療的關鍵。目前主要采用熒光定量PCR技術進行檢測，優點是快速、檢測結果較準確，但熒光定量PCR技術操作比較繁瑣，需要依賴不便于攜帶的大型儀器，這不利于在現場條件下開展檢測。此外，對于與埃博拉病毒感染癥狀相似的病原體所致感染需要再次確診，才能夠得到有效救治。所以對于病源檢測的靈敏度和特異性等具有較高要求。

發明內容

本發明是針對生物防控及新發突發傳染病防控等領域特殊病原體的現場快速多通道檢測的迫切需求而研發的，目的在于提供一種針對上述烈性傳染病病原體的檢測引物組，以及包括該引物組的試劑盒，能夠方便快速且準確地檢出樣本中的病原體種類，特異性和靈敏度極佳。

本發明提供的烈性傳染病病原體檢測引物組，包括埃博拉病毒RT-LAMP引物、拉薩熱病毒RT-LAMP引物、馬爾堡病毒RT-LAMP引物、裂谷熱病毒RT-LAMP引物、黃熱病毒RT-LAMP引物和基孔肯雅熱病毒RT-LAMP引物中的至少一種；具體核苷酸序列如下：

埃博拉病毒RT-LAMP引物：

Ebov-F3：SEQ ID NO：1，

Ebov-B3：SEQ ID NO：2，

Ebov-FIP：SEQ ID NO：3，