[發明專利]原位雜交檢測鼻咽癌組織中長鏈非編碼RNA LOC284454試劑的應用

有效

• 申請號: 201610065131.7
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105506154B
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 曾朝陽;李桂源;熊煒;李小玲;唐艷艷;楊麗婷;孛昊;李夏雨;龔朝建;張文玲;張姍姍;郭燦
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發明公開了原位雜交檢測鼻咽癌組織中長鏈非編碼RNA LOC284454試劑的應用，主要用于制備鼻咽癌輔助診斷或者療效預測制劑。通過原位雜交技術證實LOC284454在正常鼻咽上皮(NPE)中表達水平較低，40例正常鼻咽上皮中僅有6例(15％)中檢測到有LOC284454的低表達，在其余34例中檢測不到；而在112例鼻咽癌組織中有89例鼻咽癌(79.5％)中檢測到有LOC284454的表達，其中71例為高表達，18例為低表達，其余的23例鼻咽癌組織中未檢測到LOC284454的表達；高表達LOC284454的鼻咽癌患者總的生存時間和無病生存時間均明顯短于LOC284454表達低或不表達的患者。本發明為鼻咽癌的早期發現、早期治療提供了重要的參考依據。

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學領域，具體涉及原位雜交檢測鼻咽癌組織中長鏈非編碼RNALOC284454試劑用于制備鼻咽癌輔助診斷或者療效預測制劑的用途。

背景技術

人類基因組計劃及其后續的DNA元件百科全書計劃(The Encyclopedia of DNAElements Project,ENCODE)研究成果表明，蛋白編碼基因序列僅占人類基因組序列的1-3％，而人基因組中絕大部分可轉錄的序列為長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)。LncRNA廣泛地存在于各種生物中，且隨著生物復雜程度的升高，基因組中lncRNA序列的比例也相應地增大，提示lncRNA在生物進化過程中有重要意義。隨著lncRNA不斷被發現，它們的功能逐漸被詮釋，科學家們發現lncRNA廣泛而活躍地參與到生命活動不同層面的功能調控中，作為一個嶄新的領域，已經成為國際生命科學研究領域新的前沿與熱點。

LncRNA可作為功能蛋白質的信號(signal)、誘導(guide)、誘餌(decoy)或支架(scaffold)分子等多種方式，在染色質重構、基因轉錄、翻譯及蛋白修飾等多重水平調控基因的表達，并在包括發育、免疫、生殖等基本生理過程中扮演了不可替代的角色，更重要的是，lncRNA的表達與功能失調已經與包括惡性腫瘤在內的人類多種疾病緊密聯系在了一起。因此，深入研究lncRNA的功能，揭示由lncRNA介導的遺傳信息傳遞方式和表達調控網絡，不僅可以從蛋白編碼基因以外的角度重新注釋和闡明基因組的結構與功能，深入發現生命活動的本質和規律，還有望從一個新的視角認識包括腫瘤在內的多種人類常見疾病的發病機理，并為這些疾病的診斷與治療提供新的分子標志物與治療靶點。

鼻咽癌是常見高發的頭頸部惡性腫瘤，容易發生頸部淋巴結轉移，預后較差。研究表明，這種腫瘤的發生發展是多基因參與、多步驟、多階段的復雜過程，LncRNA在鼻咽癌的發生發展過程中可能也起到了重要的作用。最近我們發現lncRNA LOC284454(NCBIaccession number:NR_036515)在鼻咽癌組織和血清中表達上調，針對該lncRNA的檢測制劑也可以用于鼻咽癌的輔助診斷。我們進一步增加樣本，在112例有臨床隨訪資料的鼻咽癌石蠟存檔標本中，通過原位雜交(in situ hybridization)的方法檢測了LOC284454的表達水平，發現LOC284454在鼻咽癌組織中表達上調，高表達LOC284454的鼻咽癌患者比低表達LOC284454的鼻咽癌患者預后差，因此針對該lncRNA的檢測制劑也可以用于鼻咽癌的預后判斷。

我們通過設計并合成靶向LOC284454的短發夾RNA(short-hairpin RNA,shRNAs)序列，構建了靶向LOC284454的RNA干擾載體，轉染到鼻咽癌細胞株中，在體外培養系統和裸鼠轉移瘤體內模型中均證實靶向干擾LOC284454的表達可明顯抑制鼻咽癌細胞的侵襲與轉移能力。將LOC284454的RNA干擾載體負載到多聚賴氨酸修飾的硅納米顆粒上制成納米基因轉運體，多聚賴氨酸修飾的硅納米顆粒可保護LOC284454的RNA干擾載體免受核酸酶降解，延長作用時間，且有更高的轉染效率。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供原位雜交檢測鼻咽癌組織中長鏈非編碼RNALOC284454試劑用于制備鼻咽癌輔助診斷或者療效預測制劑的用途。