[發(fā)明專利]硫黃素T適配體、其篩選方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610064881.2
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN107024583B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 裴仁軍;王紅沿
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院蘇州納米技術(shù)與納米仿生研究所
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;C12N15/115;C12N15/11;G01N33/52;G01N33/574;C12Q1/6886
• 代理公司: 南京利豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王鋒

1.一種硫黃素T適配體的篩選方法，其特征在于包括以下步驟：

1）將單鏈DNA文庫和第一連接物標(biāo)記的捕獲鏈雜交，并將形成的雜交文庫與第二連接物標(biāo)記的載體孵育，使所述雜交文庫固定到所述載體上，所述第一連接物和第二連接物能夠特異性結(jié)合；

2）將游離的核酸序列和與捕獲鏈結(jié)合能力差的核酸序列從所述載體上洗脫，之后以硫黃素T溶液將與硫黃素T特異性作用的富集庫洗脫；

3）收集所述富集庫并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得篩選文庫；

4）以所述篩選文庫作為單鏈DNA文庫，重復(fù)進(jìn)行步驟1）～步驟3）的操作，直至獲得序列如SEQ ID No.3所示的硫黃素T適配體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于：所述單鏈DNA文庫的序列如SEQ IDNo.1所示，該序列中的n為隨機(jī)堿基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于：所述捕獲鏈的序列如SEQ ID No.2所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于：所述第一連接物和第二連接物選自生物素及鏈霉親和素，所述載體包括瓊脂糖樹脂。

5.一種硫黃素T適配體，其特征在于它的序列如SEQ ID No.3所示。

6.一種KRAS基因突變檢測探針對，其特征在于包括第一探針和第二探針，將SEQ IDNo.3所示核酸序列一分為二形成兩個(gè)裂解序列后，在該兩個(gè)裂解序列的末端分別連接KRAS突變基因互補(bǔ)序列而形成所述第一探針、第二探針。

7.權(quán)利要求5所述硫黃素T適配體或權(quán)利要求6所述KRAS基因突變檢測探針對在制備KRAS基因突變檢測傳感器、試劑盒或檢測系統(tǒng)中的用途。

8.一種KRAS基因突變檢測傳感器，其特征在于包括：將權(quán)利要求5所述硫黃素T適配體的序列一分為二并形成兩個(gè)裂解序列后，在該兩個(gè)裂解序列的末端分別連接KRAS突變基因互補(bǔ)序列而形成的第一探針、第二探針。

9.一種試劑盒，其特征在于包括：權(quán)利要求6所述的KRAS基因突變檢測探針對；以及，硫黃素T。

10.一種KRAS基因突變檢測系統(tǒng)，其特征在于包括：

權(quán)利要求6所述KRAS基因突變檢測探針對，用以與待檢測的KRAS基因共同孵育而形成待檢測體系；

硫黃素T，用于與所述待檢測體系共同孵育；以及，

熒光光譜儀，用于檢測所述待檢測體系在與硫黃素T共同孵育前后的熒光強(qiáng)度變化。