[發(fā)明專利]一種檢測維氏氣單胞菌的試劑盒和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610064778.8
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105506153B
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 敬小兵;劉天強(qiáng);黃冠軍;陽濤;劉衍鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 通威股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發(fā)明公開了一種檢測維氏氣單胞菌的方法和試劑盒，涉及一種維氏氣單胞菌的檢測技術(shù)。本發(fā)明檢測魚類致病菌的試劑盒，其包含序列如SEQ ID NO：1～2所示的引物對，擴(kuò)增來自維氏氣單胞菌的基因。本發(fā)明提供的檢測試劑盒和檢測方法可以準(zhǔn)確、有效的檢測維氏氣單胞菌，且敏感性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短，檢測快速，可以用于魚病的快速檢測和預(yù)測，預(yù)防魚病的發(fā)生，提高經(jīng)濟(jì)效益。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種維氏氣單胞菌的檢測方法和檢測試劑盒。

背景技術(shù)

維氏氣單胞菌為兼性厭氧且具有運(yùn)動(dòng)能力的革蘭氏陰性桿菌，是一種重要的人畜魚共患的致病微生物。在水產(chǎn)上，它主要引起水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物敗血癥或皮膚潰瘍等局部感染，如中華鱉腐皮病、穿孔病、出血病，鯉魚、斑點(diǎn)叉尾鮰等腹水病，華鰻爛尾病，泥鰍皮膚潰瘍病、中華絨螯蟹等敗血病。患病水產(chǎn)動(dòng)物的死亡率高達(dá)60％～100％，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前，對維氏氣單胞菌的臨床診斷多依賴于表觀病理觀察、細(xì)菌的分離鑒定等一般細(xì)菌學(xué)檢測，而維氏氣單胞菌引發(fā)疾病的病理現(xiàn)象與其他氣單胞菌極為相似，很難肉眼判定，常規(guī)的細(xì)菌分離鑒定又耗時(shí)耗力。

PCR技術(shù)以其敏感、特異、快速和操作簡單等突出的優(yōu)點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)及預(yù)防獸醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，特別是在分子水平上，使一些原本在診斷上十分困難的許多疾病得到了確診。

邊宇等，“維氏氣單胞菌RCR快速檢測方法的建立及初步應(yīng)用”，中國獸藥雜志，2013年01期公開了一種檢測維氏氣單胞菌的方法，但是其敏感度低，最低檢測限度為0.158pg/μL。王惠、邊宇等，“維氏氣單胞菌雙基因PCR檢測方法的建立”公開了一種通過同時(shí)檢測兩個(gè)基因檢測維氏氣單胞菌的方法，但是其特異性有待進(jìn)一步研究，敏感度也較低，最低檢測限度仍然為0.158pg/μL。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種新的檢測維氏氣單胞菌的試劑盒和方法。

首先，本發(fā)明提供了SEQ ID NO：1～2所示的引物對。

本發(fā)明還提供了SEQ ID NO：1～2所示的引物對在制備擴(kuò)增或檢測來自維氏氣單胞菌的基因的試劑中的用途。

本發(fā)明還提供了檢測維氏氣單胞菌的試劑盒，包含序列如SEQ ID NO：1～2所示的引物對，擴(kuò)增來自維氏氣單胞菌的基因。

本發(fā)明還提供了檢測維氏氣單胞菌的方法，包括如下步驟：

a，提取樣本DNA：提取待檢樣本中的DNA；

b，基因擴(kuò)增：用權(quán)利要求1所述的試劑盒對待檢樣本中的DNA進(jìn)行擴(kuò)增；

c，結(jié)果檢測：對DNA擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行檢測。

其中，步驟a所述的樣本為魚體或養(yǎng)殖水體。優(yōu)選地，所述的魚體為魚體的肝臟或者腎臟。

本發(fā)明提供的試劑盒和方法可以特異的擴(kuò)增維氏氣單胞菌基因組中的氣溶素基因序列，而不會(huì)擴(kuò)增得到其他魚類致病菌的基因片段，可以準(zhǔn)確、有效的檢測出待檢樣本是否感染維氏氣單胞菌，特異性強(qiáng)，可以有效區(qū)分維氏氣單胞菌與其他常見水產(chǎn)病原菌，且靈敏度高，最低檢測限度低至0.0096pg/μl，耗時(shí)短，檢測快速，可以用于魚病的快速檢測和預(yù)測，預(yù)防魚病的發(fā)生，提高經(jīng)濟(jì)效益。

下面通過具體實(shí)施方式對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但是并不是對本發(fā)明的限制，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

附圖說明

圖1引物測試結(jié)果。M：DNA Marker I；0：空白對照；1：維氏氣單胞菌15-5株；2：維氏氣單胞菌15-79株；3：維氏氣單胞菌15-96株；4：維氏氣單胞菌呂⑦株；5：維氏氣單胞菌H10株；