[發(fā)明專利]一種抗腫瘤干細(xì)胞抗原OCT4特異性CTL及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610064664.3
• 申請(qǐng)日: 2016-01-29
• 公開（公告）號(hào): CN105602903A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳尚;劉根桃;李曉祥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市中美康士生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/87;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 竺路玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生命科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗腫瘤干細(xì)胞抗原OCT4特 異性CTL及其制備方法。

背景技術(shù)

在我國，惡性腫瘤已成為危害人類健康的重要疾患之一，每年發(fā)病率為 235.23/10萬人，死亡率為148.81/10萬。近年來隨著科技，醫(yī)學(xué)診斷和治療 水平的發(fā)展和提高，但腫瘤的總體死亡率和生存率仍無明顯改善，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移依 然是導(dǎo)致癌癥預(yù)后不佳的主要原因。隨著對(duì)腫瘤生物學(xué)特性的深入研究，目前認(rèn) 為一些惡性實(shí)體腫瘤(腦膠質(zhì)瘤、肺癌、乳腺癌和大腸癌等)是一種干細(xì)胞疾病， 即腫瘤來源于腫瘤干細(xì)胞，腫瘤干細(xì)胞又稱為腫瘤起始細(xì)胞。這類細(xì)胞僅占整個(gè) 腫瘤細(xì)胞一小部分，但是具有自我更新能力和多向分化潛能，是形成不同分化程 度的腫瘤和腫瘤不斷生長的根源，可能是腫瘤治療失敗的根源。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)， 腫瘤干細(xì)胞不僅較其他腫瘤細(xì)胞更具轉(zhuǎn)移潛能，而且對(duì)化療、放射更具抗性。因 此，如何殺滅整個(gè)腫瘤內(nèi)的干細(xì)胞以獲得腫瘤穩(wěn)定而長久的退縮，甚至治愈是目 前腫瘤學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。近期有多項(xiàng)研究報(bào)道Oct4在多種惡性腫瘤組 織或細(xì)胞系中異常表達(dá)，提示Oct4除了活躍于干細(xì)胞的生長過程，還極有可能 參與成體細(xì)胞及腫瘤的發(fā)生過程，這為Oct4與惡性腫瘤的相關(guān)性研究提供了思路 和方向。

Oct4是Pit-Oct-Unc(POU)轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一，由POU5F1基因編碼產(chǎn)生的，定位于6號(hào)染色體上(6p21.31)，長度為16.40kb，屬于類蛋白。Oct4基因就是其中一個(gè)關(guān)鍵基因，也被稱為Oct3、POU5F1、OTF3或OTF4，是POU轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員。Oct4能維持胚胎干細(xì)胞的未分化狀態(tài)并促進(jìn)其不斷增殖，而它在腫瘤的發(fā)生、增殖及分化過程中起著一定作用。研究發(fā)現(xiàn)，Oct-4的異常高表達(dá)可增加干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)閻盒阅[瘤細(xì)胞潛能，而抑制其表達(dá)則可以抑制惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，并且Oct-4表達(dá)水平的高低和生殖系統(tǒng)腫瘤的惡性程度有顯著的正相關(guān)性。OCT4僅在腫瘤干細(xì)胞中存在，而腫瘤干細(xì)胞是存在的極少量的具有自我更新、高致瘤力、侵襲力及耐藥性的原始未分化細(xì)胞。對(duì)維持腫瘤干細(xì)胞自我更新、致瘤力、侵襲力及耐藥性等特性有重要作用，靶向OCT4的治療將為消滅肺癌干細(xì)胞提供新思路。針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的新型療法將與現(xiàn)有手術(shù)、化療、放療等傳統(tǒng)方法相結(jié)合，給癌癥患者帶來新的希望和福音。因此，以O(shè)CT4為靶點(diǎn)的針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的靶向治療將具有重要的臨床意義。一方面，可能作為臨床上提供判斷腫瘤預(yù)后的分子指標(biāo)；另一方面，可以利用其作為分子靶基因進(jìn)行抗腫瘤治療，來克服腫瘤放化療的抵抗性，提高腫瘤的治療療效。

在人類抗癌歷史上，與癌癥抗?fàn)幱羞^三大利器：外科手術(shù)，化療，與放射治 療。至此，免疫科學(xué)家斯坦曼利用先前發(fā)現(xiàn)的樹突狀細(xì)胞(Dendriticcell,DC)， 激發(fā)自身的免疫力清除腫瘤，利用自己的研究成果，將生命由預(yù)期的數(shù)月延長到 四年。由于他對(duì)免疫領(lǐng)域的貢獻(xiàn)在2011年獲得諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)，在腫瘤領(lǐng)域并 開創(chuàng)了一個(gè)新的天地——腫瘤免疫細(xì)胞治療。他的研究成果現(xiàn)在已經(jīng)廣泛應(yīng)用于 臨床，已經(jīng)成為繼手術(shù)、放、化療后的第四種癌癥治療方式。由于腫瘤免疫細(xì)胞 治療能夠聯(lián)合手術(shù)、化療、放療精準(zhǔn)清除殘余腫瘤細(xì)胞，防止復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，加強(qiáng) 免疫監(jiān)視作用，提升患者生存質(zhì)量和時(shí)間，并且沒有放化療的毒副作用和手術(shù)的 巨大傷害。近年來，在臨床應(yīng)用中受到越來越廣泛的關(guān)注，是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)， 已被公認(rèn)為是最具前景的腫瘤治療方法。

過繼性免疫細(xì)胞治療是指通過輸入自身或同種異體的腫瘤殺傷細(xì)胞來治療 腫瘤的方法。它不僅可以糾正細(xì)胞免疫功能的低下，促進(jìn)宿主抗腫瘤免疫的功能， 還可以直接發(fā)揮抗腫瘤的作用。其中細(xì)胞毒性T細(xì)胞的過繼治療有著特殊的優(yōu) 越性。細(xì)胞毒性T細(xì)胞的過繼治療是實(shí)體腫瘤，尤其是腫瘤相關(guān)抗原比較明確 的惡性黑色素瘤、結(jié)直腸癌、肝癌、前列腺癌、肺癌等的研究熱點(diǎn)。特異性CTLs(細(xì) 胞毒性T細(xì)胞)的產(chǎn)生是通過將腫瘤抗原負(fù)載成熟的DC(樹突狀細(xì)胞)刺激T 細(xì)胞從而獲得抗原的特異性CTL克隆。這種CTL能識(shí)別并殺傷攜帶相應(yīng)腫瘤抗 原的惡性細(xì)胞，經(jīng)過大量的擴(kuò)增就能應(yīng)用于臨床治療。這種治療方法相比其他的 治療方法具有易獲得、可操作性強(qiáng)，靶向性好，安全性高等特點(diǎn)。