[發明專利]一種可提高虎杖愈傷組織中白藜蘆醇含量的培養液及培養方法

有效

• 申請號: 201610064635.7
• 申請日: 2016-02-01
• 公開（公告）號: CN105580735B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 黃潔芳;王麗娜;畢永賢;殷海琴;陳斌;蔣麗剛
• 申請（專利權）人: 珀萊雅化妝品股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種可提高虎杖愈傷組織中白藜蘆醇含量的培養方法，其特征在于采用以下步驟：

A、虎杖愈傷組織的誘導：選擇虎杖莖段為外植體，在培養基中光照0 lx培養25天，誘導出愈傷組織，每20天繼代一次，繼代培養3次；所述培養基為MS基礎培養基中添加6-芐氨基嘌呤、6-糖基氨基嘌呤、萘乙酸、精胺、亞精胺、蔗糖而成，所述培養基中6-芐氨基嘌呤濃度為1.0 mg/L，6-糖基氨基嘌呤濃度為0.5 mg/L ，萘乙酸濃度為0.2 mg/L ，蔗糖濃度為30g/L，瓊脂濃度為8 g/L，培養基pH 5.8，培養溫度25±1 ^oC；

B、愈傷組織懸浮擴大培養及次生代謝產物白藜蘆醇的誘導：以步驟A中獲得的生長旺盛、疏松、易散的愈傷組織為懸浮培養體系的種子細胞，將其接種在一種可提高虎杖愈傷組織中白藜蘆醇含量的培養液中進行懸浮擴大培養，接種量為60~110 g/L，g/L=愈傷組織鮮重/培養基體積，得到含有愈傷組織的培養液；所述一種可提高虎杖愈傷組織中白藜蘆醇含量的培養液是含有0.5~1.8 mg/L 6-芐氨基嘌呤、0.3~1.0 mg/L 6-糖基氨基嘌呤、0.15~0.45 mg/L萘乙酸、1.0~4.5 mg/L精胺、0.5~1.25 mg/L亞精胺、20~50g/L蔗糖的MS培養液，培養液pH為5~6；對所得含有愈傷組織的培養液進行誘導懸浮培養，誘導懸浮培養的條件為：振蕩培養，搖床轉速90~130 rpm，光照強度1280~1760 lx，光照時間12~16 h/day，培養溫度25±1 ^oC，培養過程中每天向培養液中充入清潔無菌空氣一次；每12~16天繼代培養一次，繼代培養2~4次后將繼代周期縮短至6~10天，縮短繼代周期后繼續培養3~5代；在誘導懸浮培養繼代周期的第4~8天，繼代周期縮短后則在第2~5天時加入甲瓦龍酸內酯，甲瓦龍酸內酯在培養液中的終濃度為50~120 mg/L，誘導懸浮培養結束后得到白藜蘆醇含量高的虎杖愈傷組織細胞。