[發明專利]一種利用沼液耦合微藻積累碳水化合物的方法

在審

• 申請號: 201610064470.3
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105603019A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發明（設計）人: 李清彪;譚芬;王遠鵬;何寧;王海濤
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12P19/00
• 分類號: C12P19/00;C12P7/06;C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

1.一種利用沼液耦合微藻積累碳水化合物的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)利用平板劃線法于固體培養基上保存微藻；

2)從微藻平板上劃取微藻，接入到Modified3Nmedium培養液中培養，得微藻種子培 養液；

3)利用生物量與OD₆₈₅之間存在正比關系，建立OD₆₈₅與生物量之間的標準曲線；

4)從厭氧發酵罐中取沼液，離心后取上清液；

5)將步驟4)得到的上清液稀釋，并轉移到間歇式光反應器中，接種培養，定期測定 微藻生物量和營養物質變化，評價實驗效果；

6)收集微藻，再經冷凍干燥、破碎、水浴、水解后，測定微藻中的碳水化合物含量。

2.如權利要求1所述一種利用沼液耦合微藻積累碳水化合物的方法，其特征在于在步 驟1)中，所述微藻為小球藻C.sorokiniana.FACHB-275，C.vulgaris和柵藻 S.dimorphus.FACHB-1266。

3.如權利要求1所述一種利用沼液耦合微藻積累碳水化合物的方法，其特征在于在步 驟1)中，所述固體培養基采用BG11培養基，BG11培養基的組成為：1.5g/LNaNO₃， 0.03g/LK₂HPO₄，0.075g/LMgSO₄·7H₂O，0.006g/L檸檬酸，2g/LNa₂CO₃，3.6g/L CaCl₂·2H₂O，0.6g/L檸檬酸鐵銨，0.1g/LEDTA，2.86g/LH₃BO₃，1.81g/LMnCl₂·4H₂O， 0.222g/LZnSO₄·7H₂O，0.39g/LNa₂MoO₄·2H₂O，0.079g/LCuSO₄·5H₂O，0.049g/L Co(NO₃)₂·6H₂O，瓊脂粉15～20g/L。

4.如權利要求1所述一種利用沼液耦合微藻積累碳水化合物的方法，其特征在于在步 驟2)中，所述Modified3Nmedium培養液的組成為：0.75g/LNaNO₃，0.0383g/L K₂HPO₄，0.088g/LKH₂PO₄，0.075g/LMgSO₄·7H₂O，0.025g/LCaCl₂·2H₂O，0.025g/L NaCl，1.77mg/LFeCl₃·6H₂O，5.53mg/LEDTA，0.073mg/LZnSO₄·7H₂O，0.016mg/L CoSO₄·7H₂O，0.584mg/LMnSO₄·5H₂O，1.48ug/LNa₂MnO₄·2H₂O，1.49ug/LNiCl₂·6H₂O。

5.如權利要求1所述一種利用沼液耦合微藻積累碳水化合物的方法，其特征在于在步 驟2)中，所述培養的條件為：光照為8000lux，光照時間為每天連續光照24h，通2.5％ CO₂培養，溫度25℃，培養4～5天至微藻生長到對數期。

6.如權利要求1所述一種利用沼液耦合微藻積累碳水化合物的方法，其特征在于在步 驟4)中，所述沼液采用豬糞厭氧發酵后獲得；所述離心的條件可為8000rpm，離心 10min。