[發明專利]一種檢測牛奶中新霉素B含量的方法及其應用

在審

• 申請號: 201610061706.8
• 申請日: 2016-01-28
• 公開（公告）號: CN105734063A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 凌凱;吳正治;李富榮
• 申請（專利權）人: 深圳市老年醫學研究所
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/53
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

技術領域

本發明屬于食品安全檢測領域，尤其涉及一種檢測牛奶中新霉素B(NeomycinB)含量的方法及其應用。

背景技術

新霉素B是一種氨基糖苷類抗生素，屬靜止期殺菌藥。其作用機制為經主動轉運通過細胞膜，與細菌核糖體30S亞單位的一種或幾種蛋白不可逆結合，干擾mRNA與30S亞單位間起始復合物的形成，導致合成異常蛋白質；異常蛋白質結合進入細菌細胞膜，導致細胞膜滲透，細菌死亡。新霉素對需氧的革蘭陰性桿菌及部分革蘭陽性菌有效。在革蘭陰性桿菌中，對大腸桿菌等腸桿菌屬及沙雷菌屬、變形桿菌、摩根桿菌等有較強抗菌活性；在革蘭陽性菌中，對金黃色葡萄球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌等有較強抗菌活性，但是這種抗生素具有腎毒性和內耳毒性，它對內耳的傷害，往往是不可逆轉的。現在這種抗生素實際已不再臨床上使用，但是現在這種抗生素仍然廣泛應用于治療奶牛的乳腺炎和子宮內膜炎。因此，需要經常檢測牛奶中新霉素B的含量。

目前,牛奶中新霉素B殘留的檢測主要采用高效液相色譜分離分析法、液質聯用法、離子色譜法等。上述方法雖然準確度高,但需要昂貴的檢測儀器,檢測成本高,分析速度慢,主要在檢測實驗室中使用。隨著人們對食品安全的日益重視和乳品進出口貿易的高速增長,目前迫切需要一種能夠快速、靈敏的檢測牛奶中新霉素B殘留的檢測方法。

發明內容

本發明的一個目的是提供用于檢測新霉素B的成套核酸適配體。

本發明提供的用于檢測新霉素B的成套核酸適配體，由核酸適配體NEO1和核酸適配體NEO2組成；

所述核酸適配體NEO1的核苷酸序列為序列1；

所述核酸適配體NEO2的核苷酸序列為序列2。

上述成套核酸適配體中，所述核酸適配體NEO2的5’末端連接熒光基團；所述熒光基團具體為FAM。

本發明另一個目的是提供一種用于檢測新霉素B的試劑盒。

本發明提供的試劑盒，為如下1)或2)或3)：

1)包括上述的用于檢測新霉素B的成套核酸適配體；

2)包括連接NEO1的納米金膠體和核酸適配體NEO2；

3)包括連接NEO1的納米金膠體溶液和核酸適配體NEO2溶液；

所述連接NEO1的納米金膠體為將所述核酸適配體NEO1吸附到納米金膠體得到。

上述試劑盒中，3)所示的試劑盒中，所述連接NEO1的納米金膠體溶液由作為溶質的連接NEO1的納米金膠體和溶劑組成；

所述核酸適配體NEO2溶液由作為溶質的核酸適配體NEO2和溶劑組成。

所述連接NEO1的納米金膠體溶液和所述核酸適配體NEO2溶液中的溶劑均為pH值為7.2濃度為0.1mMPBS(NaCl8.0g；KCl0.2g；Na₂HPO₄1.15g加入1L水)。

上述試劑盒中，3)所示的試劑盒中，所述連接NEO1的納米金膠體溶液中的連接NEO1的納米金膠體和所述核酸適配體NEO2溶液中的核酸適配體NEO2的摩爾比為10nM：100μM；

所述連接NEO1的納米金膠體中的所述核酸適配體NEO1和所述納米金膠體的物質量比為33.04-33.4：1。

上述的成套核酸適配體或上述試劑盒在檢測樣品中是否含有新霉素B中的應用也是本發明保護的范圍；

或上述的成套核酸適配體或上述試劑盒在檢測樣品中新霉素B含量中的應用也是本發明保護的范圍；

或上述的成套核酸適配體或上述試劑盒在制備檢測樣品中是否含有新霉素B產品中的應用也是本發明保護的范圍；

或上述的成套核酸適配體或上述試劑盒在制備檢測樣品中新霉素B含量產品中的應用也是本發明保護的范圍。

本發明第三個目的是提供一種檢測樣品中新霉素B含量的方法。

本發明提供的方法，包括如下步驟：

將待測樣品、上述試劑盒中的所述連接NEO1的納米金膠體溶液和上述試劑盒中的所述核酸適配體NEO2溶液混勻，反應，得到反應液；檢測反應液的熒光值；通過反應液的熒光值計算新霉素B含量。

所述計算采用的公式如下：相對熒光值＝-1.331×新霉素B的濃度+56.760。

上述方法中，所述連接NEO1的納米金膠體溶液中的連接NEO1的納米金膠體和所述核酸適配體NEO2溶液中的核酸適配體NEO2的摩爾比為10nM：100μM；

所述連接NEO1的納米金膠體中的所述核酸適配體NEO1和所述納米金膠體的物質量比為33.04-33.4：1。