[發明專利]一種油菜轉基因成分的檢測方法

在審

• 申請號: 201610061083.4
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105624298A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 高利芬;彭海;張靜;李麗麗
• 申請（專利權）人: 江漢大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京三高永信知識產權代理有限責任公司 11138
• 代理人: 徐立

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別涉及一種油菜轉基因成分的檢測方法。

背景技術

油菜是我國主要作物，油菜轉基因技術與產品均已成熟，需要對轉基因油菜的推 廣進行監管，轉基因成分檢測是轉基因監管的技術支撐。

現有的轉基因成分檢測技術主要檢測核酸或蛋白質，其中，基于核酸的檢測方法 主要流程為：提取待測樣品中的核酸，利用PCR(PolymeraseChainReaction，聚合酶鏈反 應)的方法擴增樣品中的轉基因成分，利用實時定量、瓊脂糖電泳或芯片技術檢測轉基因成 分是否存在。

在實現本發明的過程中，發明人發現現有技術至少存在以下問題中的一種：

轉基因成分多種多樣，而現有技術一次只能檢測其中一種或少數幾種，因此，需要 對可能的多種轉基因成份逐一進行檢測，才能確定為“非轉基因”產品；一般檢測的是共轉 化的轉基因成分，而不是外源基因本身，因此，對于無標記轉基因來說，采用現有的檢測方 法進行檢測會失效；檢測基本上是定性檢測，但定量檢測又有其現實需求，例如，相鄰田塊 的轉基因油菜品種的少量花粉被傳到了非轉基因品種上，在定性檢測時，非轉基因品種將 被誤判為轉基因品種。

發明內容

為了解決現有技術的問題，本發明實施例提供了一種油菜轉基因成分的檢測方 法。所述技術方案如下：

本發明實施例提供了一種油菜轉基因成分的檢測方法，所述方法包括：

確定待測樣品中需要檢測的轉基因成分、所述待測樣品中的內源標準基因和所述 待測樣品的外源標準基因，所述待測樣品為油菜植株或所述油菜植株的一部分；

制備用于擴增所述轉基因成分、所述內源標準基因和所述外源標準基因的測試區 域的多重擴增引物；

對所述待測樣品進行抽樣并混合，得到混合樣品；

提取所述混合樣品的基因組；

向所述混合樣品的基因組中加入所述外源標準基因，得到混合核酸；

利用所述多重擴增引物對所述混合核酸進行擴增，得到擴增產物，利用所述擴增 產物構建高通量測序文庫；

對所述高通量測序文庫進行高通量測序，得到測序片段組；

分析所述測序片段組，獲得所述待測樣品中所述轉基因成分的測序片段的數量、 所述內源標準基因的測序片段的數量和所述外源標準基因的測序片段的數量；

根據所述外源標準基因的測序片段的數量，判斷實驗是否成功；

若所述實驗成功，則計算所述待測樣品種中所述轉基因成分的含量；

根據所述轉基因成分的含量判斷所述待測樣品中是否含有轉基因成分。

具體地，所述轉基因成分為外源功能基因、抗性標記基因、啟動子、終止子和外源 插入旁側序列中的至少一種。

具體地，所述內源標準基因為所述待測樣品的基因組中的單拷貝基因。

具體地，所述外源標準基因不存在于所有生物中。

具體地，所述判斷實驗是否成功的方法為：當所述外源標準基因的測序片段的數 量和所述內源標準基因的測序片段的數量均≥α1時，則實驗成功；當所述外源標準基因的 測序片段的數量或所述內源標準基因的測序片段的數量<α1時，則實驗失敗；其中，α1為判 定閾值。

具體地，所述判定所述待測樣品是否含有轉基因成分的方法為：當需要檢測的任 意一種所述轉基因成分的含量≥α2時，判定所述待測樣品含有轉基因成分；當所有所述轉 基因成分的含量<α2時，判定所述待測樣品不含有轉基因成分；其中，α2為判定閾值。

具體地，計算所述待測樣品種中所述轉基因成分的含量的方法為：第m種所述轉基因成分的含量的計算公式為其中，i為所述第m種轉基因成分的第i個測試區域，n1為所述第m種轉基因成分的所述測試區域的個數，bi為所述第m種轉基因成分的第i個所述測試區域的所述測序片段的數量，k為第k種所述內源標準基因，n3為所述內源標準基因的個數，j為第k種所述內源標準基因的第j個測試區域，n2為所述第k種內源標準基因的所述測試區域的個數，aj為所述第k種內源標準基因的第j種所述測試區域的所述測序片段的數量；N為所有所述內源標準基因的所述測試區域的總數。