[發明專利]一種水稻轉基因成分的檢測方法

在審

• 申請號: 201610060854.8
• 申請日: 2016-01-29
• 公開（公告）號: CN105586411A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 方治偉;彭海;周俊飛
• 申請（專利權）人: 江漢大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京三高永信知識產權代理有限責任公司 11138
• 代理人: 徐立

1.一種水稻轉基因成分的檢測方法，其特征在于，所述方法包括：

確定待測樣品中需要檢測的轉基因成分、所述待測樣品中的內源標準基因和所述待測 樣品的外源標準基因，所述待測樣品為水稻植株的根、莖、葉、種子和花中的至少一種；

制備用于擴增所述轉基因成分、所述內源標準基因和所述外源標準基因的測試區域的 多重擴增引物；

對所述待測樣品進行抽樣并混合，得到混合樣品；

提取所述混合樣品的基因組；

向所述混合樣品的基因組中加入所述外源標準基因，得到混合核酸；

利用所述多重擴增引物對所述混合核酸進行擴增，得到擴增產物，利用所述擴增產物 構建高通量測序文庫；

對所述高通量測序文庫進行高通量測序，得到測序片段組；

分析所述測序片段組，獲得所述待測樣品中所述轉基因成分的測序片段的數量、所述 內源標準基因的測序片段的數量和所述外源標準基因的測序片段的數量；

根據所述外源標準基因的測序片段的數量，判斷實驗是否成功；

若所述實驗成功，則計算所述待測樣品種中所述轉基因成分的含量；

根據所述轉基因成分的含量判斷所述待測樣品中是否含有轉基因成分。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述轉基因成分為外源功能基因、抗 性標記基因、啟動子、終止子和外源插入旁側序列中的至少一種。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述內源標準基因為所述待測樣品的 基因組中的單拷貝基因。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述外源標準基因不存在于所有生物 中。

5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述判斷實驗是否成功的方法為：當 所述外源標準基因的測序片段的數量和所述內源標準基因的測序片段的數量均≥α1時，則 實驗成功；當所述外源標準基因的測序片段的數量或所述內源標準基因的測序片段的數量 <α1時，則實驗失敗；其中，α1為判定閾值。

6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述判定所述待測樣品是否含有轉基 因成分的方法為：當需要檢測的任意一種所述轉基因成分的含量≥α2時，判定所述待測樣 品含有轉基因成分；當所有所述轉基因成分的含量<α2時，判定所述待測樣品不含有轉基因 成分；其中，α2為判定閾值。

7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，計算所述待測樣品種中所述轉基因成 分的含量的方法為：第m種所述轉基因成分的含量的計算公式為其中，i為所述第m種轉基因成分的第i個所述測試區域，n1為所述第m種轉基因成分的所述 測試區域的個數，bi為所述第m種轉基因成分的第i個所述測試區域的所述測序片段的數 量，k為第k種所述內源標準基因，n3為所述內源標準基因的個數，j為第k種所述內源標準基 因的第j個測試區域，n2為所述第k種內源標準基因的所述測試區域的個數，aj為所述第k種 內源標準基因的第j種所述測試區域的所述測序片段的數量；N為所有所述內源標準基因的 所述測試區域的總數。

8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述外源標準基因的質量與所述混合 樣品的基因組的總質量的比例大于1/100000。