[發明專利]一種抗大豆疫霉根腐病基因及應用

有效

• 申請號: 201610060330.9
• 申請日: 2016-01-28
• 公開（公告）號: CN105602963B
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發明（設計）人: 陳慶山;辛大偉;朱榮勝;胡振幫;蔣洪蔚;齊照明;韓雪;楊蕊
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12Q1/6895
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 楊佳龍

1.一種抗大豆疫霉根腐病基因在大豆育種過程中的應用，其特征在于：屬于基因在分子標記輔助選擇育種中的應用；所述基因，是大豆基因GmDRR，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；使用特異性引物GmDRRf和GmDRRr進行PCR擴增，其中，特異性引物GmDRRf的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，特異性引物GmDRRr的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；是以大豆GmUKN1基因或actin基因為內參基因，利用PCR定量分析待鑒定品種的GmDRR基因的表達量差異，分析待鑒定品種的大豆疫霉根腐病的抗性；所述大豆疫霉根腐病的抗性，是對大豆疫霉根腐病菌1號和3號生理小種的抗性；具體步驟如下：

1)利用大豆疫霉根腐病菌1號或3號生理小種感染待測品種，獲得感染品種；

2)提取步驟1)所得的感染品種的cDNA，并以所得的cDNA為模板，以內參基因GmUKN1的引物對和目的基因GmDRR的特異性引物對為引物進行PCR擴增，并通過熒光定量PCR儀實時檢測；

3)根據步驟2)的檢測結果分析待測品種的大豆疫霉根腐病抗性；

步驟2)所述目的基因GmDRR的特異性引物對，為引物GmDRRf和GmDRRr，核苷酸序列分別如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；所述內參基因GmUKN1引物對，分別如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示；步驟2)PCR擴增，擴增條件為：先在95℃30s的條件下進行一個循環，再在95℃5s；60℃30s的條件下進行40個循環；步驟3)所述分析待測品種的大豆疫霉根腐病抗性，是，如果在待測品種在接種大豆疫霉根腐病菌后：

同時存在下列情況，則待測品種為抗性品種：在葉中基因GmDRR的表達量的最大增加速度，待測品種大于已知的抗性品種；在根中接種后6h內基因GmDRR的表達量呈正增長；在根中基因GmDRR的表達量最大量大于14倍；在根中基因GmDRR的表達量的最大增加速度，待測品種小于已知的抗性品種；

同時存在下列情況，則待測品種為感病品種：在葉中基因GmDRR的表達量的最大增加速度，待測品種小于已知的感病品種；在根中接種后6h內基因GmDRR的表達量無增長；在根中基因GmDRR的表達量最大量小于12倍；在根中基因GmDRR的表達量的最大增加速度，待測品種大于已知的感病品種。