[發(fā)明專利]一種室內(nèi)高通量玉米粗縮病人工接種鑒定方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610058533.4
• 申請日: 2016-01-26
• 公開（公告）號: CN105724001A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發(fā)明（設計）人: 任春梅;程兆榜;楊柳;繆倩;陸芳;陶亞群;周益軍
• 申請（專利權）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學院
• 主分類號: A01G1/00
• 分類號: A01G1/00;A01G7/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發(fā)明涉及一種室內(nèi)高通量玉米粗縮病人工接種鑒定方法及其在農(nóng)業(yè)上的應用，屬于農(nóng)業(yè)科學技術領域。

背景技術：

玉米粗縮病是危害玉米的一種世界性病毒病害，由呼腸孤病毒科(Reoviridae)斐濟病毒屬(Fjivirus)的水稻黑條矮縮病毒(Riceblackstreakeddwarfvirus，RBSDV)、馬德里約柯托病毒(MaldeRioCuartovirus，MRCV)和玉米粗縮病毒(Maizeroughdwarfvirus，MRDV)三種病毒引起。經(jīng)對我國玉米粗縮病分離物測序比對研究確認引起我國玉米粗縮病的病原物為水稻黑條矮縮病毒(RBSDV)，該病歷史上曾先后多次在我國玉米上暴發(fā)流行，據(jù)統(tǒng)計，2005年以來在河北、山東、山西、江蘇等省的夏玉米區(qū)特別是套播或晚春播、早夏播玉米上發(fā)生危害嚴重；2008年山東省發(fā)生面積達73.3萬hm²，絕產(chǎn)1.67萬hm²；同年在大連市也大面積發(fā)生，重病田塊發(fā)病率達60％-80％，造成了巨大的經(jīng)濟損失，目前，粗縮病已經(jīng)成為我國玉米上主要病害之一，對玉米生產(chǎn)構成了嚴重威脅。

目前玉米粗縮病防治的主要措施是調整播期，其在病害防治中發(fā)揮了重要作用。但播期調整在地區(qū)間、品種間有其局限性，尤其是鮮食玉米上由于市場需求限制了播期調整的空間，因此培育并利用抗病品種成為玉米粗縮病防控上的新需求。大規(guī)模篩選玉米種質資源是培育抗性品種的基礎，對候選種質資源進行抗性鑒定是必須措施。

目前對玉米粗縮病進行種質資源鑒定主要有自然鑒定法和室內(nèi)人工接種鑒定法兩種。前者因其受到自然條件的約束，容易受環(huán)境條件、灰飛虱種群發(fā)生遷飛數(shù)量、帶毒率差異等因素的影響，使得鑒定結果在地區(qū)間和年度間差異較大，必須經(jīng)多年多點重復鑒定才能獲得準確結果，不但增加了工作量，而且加長了育種時間；后者在前者基礎上，根據(jù)該病由灰飛虱刺吸并以持久性方式間歇傳播的特點發(fā)展起來的一種室內(nèi)人工接種鑒定方法，而由于種質資源的鑒定需要大量的傳毒灰飛虱，灰飛虱人工飼養(yǎng)成本高，飼毒步驟復雜且毒源獲得時間有限導致帶毒灰飛虱難以獲得，難以滿足抗性鑒定的規(guī)模量需求，從而大大限制了灰飛虱人工接種鑒定的推廣應用。本實驗室經(jīng)過多年對灰飛虱及其傳播病毒的研究，已經(jīng)發(fā)明了一種水稻黑條矮縮病毒室內(nèi)活體保存方法(專利號：ZL201210385208.0)，該方法可常年不間斷獲得大量高帶毒率灰飛虱，滿足了室內(nèi)人工接種鑒定大量接種體的需求；另外經(jīng)摸索創(chuàng)建了一套關于該病的高通量室內(nèi)人工接種鑒定方法，該方法有效地掌握了玉米接種的敏感期，確定了適合的接種量和恰當?shù)慕臃N時間，從而大大提高了接種效率和精準度，節(jié)約了試驗成本，為玉米抗粗縮病的資源發(fā)掘篩選、品種選育和抗性遺傳規(guī)律研究等提供了有效的技術手段。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明針對目前玉米粗縮病自然接種鑒定準確性低而人工接種鑒定帶毒灰飛虱規(guī)模量難以實現(xiàn)等難題，提供了一種室內(nèi)高通量玉米粗縮病人工接種鑒定方法。

本發(fā)明的特征在于：在室內(nèi)條件下，利用常年室內(nèi)人工飼養(yǎng)的帶毒灰飛虱為接種體，一定規(guī)模數(shù)量的玉米種子在一種特定接種器中，于萌芽初期接種對應數(shù)量的接種體，接種一定時間后，移植于盆缽或大田中培養(yǎng)至發(fā)病顯癥，以發(fā)病率高低評價待測玉米品種對玉米粗縮病的抗性水平。

在上述方法中，“常年室內(nèi)人工飼養(yǎng)的帶毒灰飛虱”為根據(jù)專利“水稻黑條矮縮病毒室內(nèi)活體保存方法(專利號：ZL201210385208.0)”的方法在室內(nèi)常年人工飼養(yǎng)的帶毒率在30％以上的灰飛虱群體。

所述的“一定規(guī)模數(shù)量的玉米種子”是指單個容器中播有效的玉米種子10～100粒。

所述的“一種特定接種器”是指內(nèi)徑4.5～10cm，高6～14cm的圓形或方形透光容器。

所述的“于萌芽初期接種對應數(shù)量的接種體”中“萌芽初期”是指玉米種子萌動至第一張葉片頂出芽鞘前；“對應數(shù)量的接種體”是根據(jù)接種時種子萌發(fā)時間長短和玉米種子的數(shù)量接入相應數(shù)量的灰飛虱，平均接種帶毒蟲量為0.1頭/株至0.9頭/株。

所述的“接種一定時間”是指接種玉米49～72小時。