[發明專利]一株鹿角靈芝菌株及其應用

有效

• 申請號: 201610058137.1
• 申請日: 2016-01-28
• 公開（公告）號: CN105586272B
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 陳蕾蕾;陳相艷;趙雙枝;裘紀瑩;徐慧;張翔;王易芬;孫華
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院農產品研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A61K36/074;A61P35/00;C12R1/645
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司37205
• 代理人: 徐槐

技術領域

本發明提供了一株鹿角靈芝菌株及其應用，具體涉及該菌株在制備抗腫瘤藥物中的應用，屬于微生物領域。

背景技術

靈芝別名萬年蕈或靈芝草，屬于擔子菌綱，多孔菌目，多孔菌科，靈芝菌屬，其中的鹿角靈芝(Ganoderma amboinense)生長中會形成類似鹿角的形態，屬于靈芝中的名貴品種。近代醫學研究發現鹿角靈芝有增強免疫，促進新陳代謝，抗腫瘤，延緩衰老等作用，其關鍵活性成分是靈芝多糖和靈芝三萜。

傳統人工栽培靈芝，周期長，生產效率低，受環境影響大。而通過靈芝液體發酵技術，不但能短時間內培養出大量菌絲體，縮短生產時間，而且能獲得質量好且穩定的目標活性產物，營養和藥用價值都不低于子實體，正逐步應用于藥物，食品，美容化妝品等領域。靈芝液體發酵技術的關鍵在于尋找適合的菌株，一方面要有較高的靈芝多糖和靈芝三萜類化合物產量，一方面要能適應簡單的培養方法和廉價的培養基成分。

發明內容

本發明的目的在于提供一株鹿角靈芝菌株及其應用，本發明鹿角靈芝菌株采集自山東泰山野生靈芝，命名為NCPSLZ1，菌株NCPSLZ1通過發酵后，含有較高含量的靈芝多糖和靈芝三萜類化合物。

靈芝多糖具有廣泛的藥理活性，能提高機體免疫力，提高機體耐缺氧能力，消除自由基，抑制腫瘤、抗輻射，提高肝臟、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白質能力，延長壽命，靈芝多糖還具有刺激宿主非特異性抗性、免疫特異反應以及抑制移植腫瘤生理活性的特性。對心血管疾病、氣喘、過敏、神經衰弱、胃熱等有顯著效果。還具有降血壓、降血脂、降血瘀、改善血液循環、皮膚美容等作用。

靈芝三萜類化合物的藥理作用為：保肝作用；抗腫瘤作用；抗HIV-1`及HIV-1蛋白酶活性；抑制組胺釋放；抑制血管緊張素轉化酶(ACE)；抑制膽固醇合成；鎮痛作用；對血小板聚氯的影響；對蛋白金合歡酯轉移酶的抑制作用；抗氧化作用；抑制真核細胞DNA多聚酶活性。

本發明鹿角靈芝菌株NCPSLZ1的保藏編號為CCTCC No.M2015796；保藏單位為中國典型培養物保藏中心；保藏日期為2015年12月29日；保藏地址為中國武漢武漢大學，該鹿角靈芝菌株NCPSLZ1為Ganoderma amboinense NCPSLZ1。

本發明菌株NCPSLZ1由金唯智生物科技(北京)有限公司進行18sDNA菌種鑒定，結果表明該菌株屬于鹿角靈芝(Ganoderma amboinense NCPSLZ1)，并與已公開的鹿角靈芝菌株18sDNA序列有區別，同源性低于100％。

本發明菌株NCPSLZ1液體培養的方法，具體步驟如下：

(1)母種擴增

無菌條件下剖取小塊鹿角靈芝菌株NCPSLZ1，移接到斜面培養基上，加塞，至恒溫培養箱內，25-29℃中培養7天；優選的，菌株NCPSLZ1移接到斜面培養基上，27℃中培養7天；

斜面培養基：馬鈴薯洗凈，去皮，稱取200g，切成小塊，與30g麥麩，加水1000mL煮沸，保持30min，過濾，濾液中加入瓊脂20g，加熱使其全部融化后，加入葡萄糖30g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂1g，pH為7.0，分裝入試管，放入高壓滅菌鍋滅菌，溫度為121℃，時間為30min，制成試管斜面(18mm×180mm)備用；

(2)種子液制備

在斜面培養基上取1cm²的菌絲體，接種于種子液培養基中，置于搖床中25-29℃、140-160r/min培養7天；優選為，菌絲體接種于種子液培養基中，置于搖床中27℃、150r/min培養7天

種子液培養基，按質量分數計：15％土豆汁，3％麥麩，3％葡萄糖，0.2％磷酸二氫鉀，0.1％硫酸鎂，pH為7.0，培養液分裝于500mL三角瓶中，每瓶裝250mL，121℃滅菌30min，冷卻后取出備用。

(3)發酵罐發酵

將種子液按10％(v/v)接種量接種到發酵罐中，25-29℃恒溫培養80h，其中0-36小時菌絲體遲緩期內攪拌速度90-110r/min，36-70小時菌絲體對數生長期內攪拌速度110-130r/min，70-80小時菌絲體生長穩定期內攪拌速度90-110r/min；優選的，0-36小時菌絲體遲緩期內攪拌速度100r/min；36-70小時菌絲體對數生長期內攪拌速度120r/min，70-80小時菌絲體生長穩定期內攪拌速度100r/min。

發酵罐培養基(質量分數)：20％土豆汁，3％的麥麩，3％葡萄糖，0.2％磷酸二氫鉀，0.1％硫酸鎂，pH為7.0。