[發明專利]一種海藻酸鈉-殼聚糖固定木聚糖酶的方法

在審

• 申請號: 201610057210.3
• 申請日: 2016-01-27
• 公開（公告）號: CN107012137A
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 蔡青和;米雁;李明明;馮濤;朱琳娜;程媛媛
• 申請（專利權）人: 上海歐耐施生物技術有限公司
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司31224
• 代理人: 呂伴

1.海藻酸鈉-殼聚糖固定木聚糖酶的方法，其特征在于，通過以下步驟完成：

(1)原料混合步驟

稱取一定量的海藻酸鈉充分溶解于蒸餾水中形成一膠體溶液，向該膠體溶液中加入適量的木聚糖酶液，調節pH至6.0～7.0，充分攪拌混勻，得到混合液1；

分別稱取一定量的殼聚糖和氯化鈣溶解于蒸餾水中，調節pH至3.0～6.0，充分攪拌混勻，得到混合液2；

(2)微球成形及包覆步驟

采用帶有針頭的蠕動泵將步驟(1)所得混合液1，滴入至步驟(1)所得混合液2中，得到直徑2～3mm的光滑微球；

(3)低溫固化步驟

將步驟(2)中所得光滑微球置于3℃-10℃環境中進行低溫固化得到固化微球，其中低溫固化時間為1～4h；

(4)洗脫過濾步驟

將步驟(3)制備的固化微球以蒸餾水沖洗去除表面殘留雜質得到洗脫微球；

(5)低溫干燥步驟

將洗脫微球置于35～45℃的恒溫干燥箱內進行低溫干燥得到近似球型顆粒，干燥時間4～8h；

(6)顆粒成型

篩選步驟(5)得到的近似球型的固定化酶顆粒。

2.如權利要求1所述的海藻酸鈉-殼聚糖固定木聚糖酶的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述海藻酸鈉質量百分比濃度為1.0～3.0％，所述殼聚糖質量百分比濃度為0.5～4.5％,氯化鈣質量百分比濃度為0.5～2.5％。

3.如權利要求1或2所述的海藻酸鈉-殼聚糖固定木聚糖酶的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述混合液1制備過程中的pH值采用質量百分比濃度為5％的醋酸溶液進行調節。

4.如權利要求1或2所述的海藻酸鈉-殼聚糖固定木聚糖酶的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述混合液2制備過程中的pH值采用質量百分比濃度為5％的醋酸溶液進行調節。

5.如權利要求1所述的海藻酸鈉-殼聚糖固定木聚糖酶的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述混合液1以3滴/秒的速度滴入至步驟(1)所得混合液2中。

6.如權利要求1所述的海藻酸鈉-殼聚糖固定木聚糖酶的方法，其特征在于，所述步驟(3)重復三次。

7.如權利要求1所述的海藻酸鈉-殼聚糖固定木聚糖酶的方法，其特征在于，步驟(6)得到的近似球型顆粒的固定化木聚糖酶進行包埋率、穩定性及酶活回收率測定方法如下：

固定化酶的包埋率測定：固定化酶的包埋率(％)＝固定化酶量(g)/酶總添加量(g)×100％；

固定化酶活回收率測定：酶活回收率(％)＝固定化酶的總活力/游離酶的總活力×100％

固定化酶的穩定性測定：分別取一定量的固定化酶與游離酶；(a)在18℃、28℃、38℃、48℃、58℃、68℃、78℃溫度下分別測定固定化酶與游離酶的活力；(b)在pH值為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0值下測定固定化酶與游離酶的活力。