[發明專利]與家蠶核型多角體病毒感染相關的microRNA的應用

有效

• 申請號: 201610057131.2
• 申請日: 2016-01-27
• 公開（公告）號: CN105483269B
• 公開（公告）日: 2018-08-31
• 發明（設計）人: 吳萍;郭錫杰;李龍;陳濤
• 申請（專利權）人: 江蘇科技大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 李靜

本發明公開了一種與家蠶核型多角體病毒感染相關的microRNA的應用。所述的應用為bmo?miR?277?5p在制備檢測家蠶核型多角體病毒感染的試劑盒中的應用，或者所述的應用為bmo?miR?277?5p在抑制基因表達中的應用，所述的基因轉錄后的mRNA具有如SEQ ID NO.12所示序列的3’UTR。本發明開拓了家蠶microRNA特別是bmo?miR?277?5p的新用途，可為研究家蠶與核型多角體病毒的互作機制提供新的研究方向，同時為家蠶核型多角體病毒的診斷、防治提供新的思路。

技術領域

本發明涉及家蠶microRNA，尤其涉及一種與家蠶核型多角體病毒感染相關的microRNA的應用。

背景技術

家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus，BmNPV)屬昆蟲桿狀病毒科(Baculoviridae)，核型多角體病毒屬(Nucleopolyhedrovirus)，病毒粒子為桿狀，基因組大小約為128kb,編碼約100多個基因。該病毒傳染性極強，難以控制，暴發頻繁，給養蠶業造成了巨大的經濟損失。在宿主昆蟲細胞內,BmNPV DNA的復制及基因的表達是一種有序發生的級聯事件，其感染過程依賴于其基因的階段性調節和依次表達，即前一階段的基因產物直接或間接的反式作用于下一階段的基因轉錄。病毒感染早期，轉錄激活因子可以誘導桿狀病毒基因的表達并選擇性的調控特定種類的宿主基因的表達從而建立感染。感染晚期階段主要是病毒DNA的復制和結構基因的表達。

MicroRNA是一類小的非編碼RNA，廣泛存在于動物、植物和病毒等生物中。RNA干擾(RNA interference)作為一種先天的抵抗病毒感染的防御機制最早是在植物中發現的,隨后發現，RNA干擾在昆蟲自身免疫體系中也扮演著重要角色。microRNA廣泛參與包括生長發育、細胞凋亡、腫瘤、抗病毒等一系列重要的生命過程。研究表明，宿主編碼的microRNA在受到病毒感染后，其表達水平會發生顯著變化。差異表達的microRNAs可能是由宿主免疫應答反應引起或由病毒感染誘導的調控因子導致。另一方面，病毒編碼的miRNA也可調控自身與病毒復制相關基因或宿主免疫相關基因，從而進一步增加了宿主-病毒互作的復雜性。

目前，與家蠶核型多角體病毒感染相關的microRNA研究較少，因此本領域需要鑒定出相關microRNA或者對已知microRNA功能及用途進行研究，為研究家蠶與核型多角體病毒的互作機制提供基礎，同時為家蠶核型多角體病毒的檢測及防治提供新的思路。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的問題，本發明開拓了家蠶microRNA特別是bmo-miR-277-5p的新用途。

本發明通過以下技術方案予以實現：

本發明提供了bmo-miR-277-5p在制備檢測家蠶核型多角體病毒感染的試劑盒中的應用。

bmo-miR-277-5p為家蠶(Bombyx mori)的一種microRNA，與家蠶核型多角體病毒感染緊密相關，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，GenBank登錄號為LM381765.1。實驗證明，bmo-miR-277-5p在感染BmNPV的家蠶中的表達水平顯著高于正常家蠶中的表達水平。因此，可利用bmo-miR-277-5p，制備試劑盒，通過檢測bmo-miR-277-5p的表達水平，判斷家蠶是否被BmNPV所感染。

所述家蠶為家蠶的幼蟲。

本發明還提供了一種檢測家蠶核型多角體病毒感染的試劑盒，該試劑盒用于檢測家蠶中bmo-miR-277-5p的表達水平。通過檢測bmo-miR-277-5p與對照的表達水平，進行比較，判斷家蠶是否被BmNPV所感染：如果待判定家蠶的bmo-miR-277-5p的表達水平顯著高于對照的表達水平，則提示家蠶已被BmNPV感染，否則則提示未被BmNPV感染。本發明中，所述的顯著是指具有統計學意義上的顯著性，p＜0.05。