[發明專利]構建高成骨活性骨的方法

有效

• 申請號: 201610057023.5
• 申請日: 2016-01-28
• 公開（公告）號: CN105536067B
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發明（設計）人: 侯天勇;陳貝克;李志強;邢軍超;羅飛;張帥;許建中
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/22;A61L27/38;A61L27/54
• 代理公司: 重慶志合專利事務所(普通合伙) 50210
• 代理人: 胡榮琿

本發明涉及一種構建高成骨活性骨的方法，有以下步驟：1)取同種異體骨脫鈣骨支架；融合肽溶解在蔗糖溶液中，至溶液的終濃度為1％，超聲處理，得到肽溶液；2)取同種異體脫鈣骨支架完全浸泡在肽溶液中4?8分鐘，取出，用磷酸緩沖鹽溶液沖洗，得到自組裝肽修飾的同種異體脫鈣骨支架材料；3)將骨髓注入裝填有自組裝肽修飾的同種異體骨脫鈣骨支架材料的骨生長富集器中，骨髓富集若干次，得到高成骨活性骨。該方法能使同種異體骨支架材料高效率富集可促進骨再生細胞，滿足成骨的需要，得到的是高成骨活性骨移植材料。

技術領域

本發明涉及一種生物醫學的骨基質材料，特別涉及一種構建高成骨活性骨的方法。

背景技術

因外傷、感染、腫瘤等各種原因所致的骨缺損十分常見，骨修復過程，是一個多蛋白、多因子協調作用的復雜調控過程。

同種異體骨(DBM)是目前最常用的組織工程骨支架材料，經過深低溫凍存、脫脂、脫功能蛋白、脫鈣、γ射線輻照等一系列處理后，有極小的免疫源性，因其天然的三維空間結構、一定的骨誘導活性等是一種理想的組織工程骨支架材料。

在組織工程骨成骨修復中，可促進骨再生的細胞和細胞因子在骨支架中的濃度，對于成骨有著非常重要的作用。

骨髓、血液等組織液中含有一些可促進骨再生的細胞和細胞因子。這些細胞和因子除了具有一定的體積之外還具有一定的表面電荷。通常，為了提高支架材料中上述成份的濃度，采用縮小支架材料孔徑的方法提高富集效率。但是，這種方法富集效率雖有提高，但是富集的倍數局限在1.5-2倍左右，難以滿足成骨的需要，而且對體積很小的細胞因子富集效果不佳。

發明內容

本發明的目的是提供一種構建高成骨活性骨的方法，該方法能使同種異體骨支架材料高效率富集可促進骨再生細胞，滿足成骨的需要，得到的是高成骨活性骨移植材料。

本發明的技術方案是：

構建高成骨活性骨的方法，有以下步驟：

1)富集材料的制備

取同種異體骨脫鈣骨支架；

純度≥95％的融合肽，溶解在20％蔗糖溶液中，至溶液的終濃度為1％，超聲處理30分鐘，得到肽溶液；

2)取脫同種異體鈣骨支架完全浸泡在肽溶液中4-8分鐘，取出，用pH值7.4的磷酸緩沖鹽溶液沖洗，得到自組裝肽修飾的同種異體脫鈣骨支架材料；

3)富集

將骨髓注入裝填有自組裝肽修飾的同種異體骨脫鈣骨支架材料的骨生長富集器中，骨髓富集若干次，得到構建高成骨活性骨材料。

所述融合肽包含RADA16-I肽和偶聯于RADA16-I肽序列的C端的osteostatin肽(TRSAW)，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；或者所述融合肽包含由RADA16-I肽序列的C端經由氨基酸殘基GG與osteostatin肽(TRSAW)偶聯形成，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

所述RADA16-I肽的氨基酸序列為SEQ ID NO:1。

所述osteostatin肽的序列如SEQ ID NO:4所示。

步驟3)所述的骨髓富集為4次。

本發明采用物理化學雙修飾，利用納米級自組裝肽RADA16-I，等帶有一定電荷的材料來修飾同種異體骨等孔徑較大的支架材料，納米級自組裝肽等材料凝固在支架材料的表面可以減小材料的孔徑，提高富集效率；同時，凝固在支架材料表面的納米級自組裝肽還帶有一定電荷的集團，可以通過電荷間的相互作用提高對同樣帶有不同電荷的細胞和細胞因子的吸附作用，進一步提高富集效果，提高富集材料中的細胞和因子的濃度，進一步提高成骨能力。

附圖說明