[發明專利]一種基于RPA的日本血吸蟲核酸檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201610056643.7
• 申請日: 2016-01-27
• 公開（公告）號: CN105648059B
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 邢微微;徐東剛;孫魁;王園園;馮驚濤;喻鑫玲;羅志宏;毛金武;付文亮
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 叢芳;張鵬

1.一種基于RPA的日本血吸蟲核酸檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含：RPA凍干顆粒，緩沖液，醋酸鎂，RPA反應引物，RPA反應探針，所述RPA反應引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1和SEQ ID No.2，所述RPA反應探針的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.3所示。

2.根據權利要求1所述基于RPA的日本血吸蟲核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含雙蒸水和日本血吸蟲基因組DNA。

3.根據權利要求1所述基于RPA的日本血吸蟲核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述RPA凍干顆粒包含噬菌體重組酶UvsX，輔助因子UvsY，DNA聚合酶，單鏈DNA結合蛋白，dNTPS。

4.根據權利要求1所述基于RPA的日本血吸蟲核酸檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖液為Rehydration Buffer。

5.一種利用權利要求1所述基于RPA的日本血吸蟲核酸檢測試劑盒的非疾病診斷和治療目的的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在RPA凍干顆粒中加入29.5μL Rehydration Buffer，2.1μL 10μM Primer A，2.1μL10μM Primer B，0.6μL 10μM探針，10.7μL雙蒸水，2.5μL模板，在反應管蓋上加醋酸鎂2.5μL，上下顛倒反應管使之充分混勻后離心，放置于TwistDX熒光檢測器內，儀器自動升溫至38℃孵育，在5-20分鐘內通過觀測熒光曲線進行結果判讀；

(2)結果判定：含有日本血吸蟲基因組DNA的反應管熒光曲線上升，陰性對照為平滑的直線；

所述Primer A的序列如序列表SEQ ID No.1所示；所述Primer B的序列如序列表SEQID No.2所示；所述探針的序列如序列表SEQ ID No.3所示；所述模板為日本血吸蟲基因組DNA。