[發(fā)明專利]聚乙烯醇微載體及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610056561.2
• 申請日: 2016-01-28
• 公開（公告）號(hào): CN105462915B
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 簡軍;陳雄偉;崔志明
• 申請（專利權(quán)）人: 愛美客技術(shù)發(fā)展股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C08J3/24;C08J3/16;C08L29/04
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 趙尊生

1.一種聚乙烯醇微載體，它是通過反向懸浮將聚乙烯醇溶液在油相中分散成球形小液粒，通過交聯(lián)劑對聚乙烯醇進(jìn)行交聯(lián)，經(jīng)過固化、洗滌和篩分步驟得到聚乙烯醇微球；所述的交聯(lián)劑為戊二醛；其特征在于：

微載體的粒徑為60~250μm，微載體的密度為1.02~1.07g/cm³；

具體制備方法經(jīng)過如下步驟：

1）將200 g 10%的聚乙烯醇溶液加入含有2 g span-80的300 mL液體石蠟中，用鹽酸調(diào)pH為1～2，40-65℃下，以200 -280 rpm 速度進(jìn)行攪拌5-10 min；

2）降溫至40℃，以280 rpm速度繼續(xù)攪拌20-30 min；加入50%的戊二醛3.5 mL，保持溫度40℃，以280 rpm速度繼續(xù)攪拌50-60 min；升溫至60℃，繼續(xù)攪拌50-60 min；

3）停止反應(yīng)，濾出微球，用10倍體積的70±10℃熱水清洗3-4次，再用5倍體積的乙醇清洗3-5次，最后用4-5倍體積的石油醚清洗2-3次；經(jīng)80℃烘干后，去除殘留的試劑；

4）篩分：將得到的聚乙烯醇微載體放入純水中清洗，先用100目的不銹鋼篩網(wǎng)進(jìn)行篩分，去除大于100目篩孔的微載體；余下的微載體用180目不銹鋼篩子對微球進(jìn)行篩分，保留大于180目篩孔的微載體，即可；

5）將得到的微球樣品浸泡于pH=7的磷酸緩沖溶液中備用。

2.一種聚乙烯醇微載體的制備方法，其特征在于經(jīng)過如下步驟：

1）將200 g 10%的聚乙烯醇溶液加入含有2 g span-80的300 mL液體石蠟中，用鹽酸調(diào)pH為1～2，40-65℃下，以200 -280 rpm 速度進(jìn)行攪拌5-10 min；

2）降溫至40℃，以280 rpm速度繼續(xù)攪拌20-30 min；加入50%的戊二醛3.5 mL，保持溫度40℃，以280 rpm速度繼續(xù)攪拌50-60 min；升溫至60℃，繼續(xù)攪拌50-60 min；

3）停止反應(yīng)，濾出微球，用10倍體積的70±10℃熱水清洗3-4次，再用5倍體積的乙醇清洗3-5次，最后用4-5倍體積的石油醚清洗2-3次；經(jīng)80℃烘干后，去除殘留的試劑;

4）篩分：將得到的聚乙烯醇微載體放入純水中清洗，先用100目的不銹鋼篩網(wǎng)進(jìn)行篩分，去除大于100目篩孔的微載體；余下的微載體用180目不銹鋼篩子對微球進(jìn)行篩分，保留大于180目篩孔的微載體，即可；

5）將得到的微球樣品浸泡于pH=7的磷酸緩沖溶液中備用。

3.權(quán)利要求1所述的聚乙烯醇微載體在哺乳動(dòng)物貼壁細(xì)胞發(fā)酵生產(chǎn)酶、生長因子、疫苗和單克隆抗體生物制品生產(chǎn)中的應(yīng)用。