[發(fā)明專利]用于修復卵巢功能的細胞制劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610055268.4
• 申請日: 2016-01-27
• 公開（公告）號: CN105663168A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發(fā)明（設計）人: 曾憲卓;魯菲
• 申請（專利權）人: 深圳愛生再生醫(yī)學科技有限公司
• 主分類號: A61K35/54
• 分類號: A61K35/54;A61K45/06;A61K38/42;A61P15/08;A61K38/18;A61K38/20;A61K31/727;A61K35/28;A61K31/722;A61K31/43;A61K31/7036
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1.一種用于修復卵巢功能的細胞制劑，其特征在于，包括羊膜間充質(zhì)干 細胞和卵巢細胞。

2.根據(jù)權利要求1所述的用于修復卵巢功能的細胞制劑，其特征在于， 所述細胞制劑中，所述羊膜間充質(zhì)干細胞的濃度為(1～5)×10⁵個/ml，所述 卵巢細胞的濃度為(4～8)×10⁵個/ml。

3.根據(jù)權利要求1所述的用于修復卵巢功能的細胞制劑，其特征在于， 所述細胞制劑中還包括肝素鈉、白介素-6、白介素-3、干細胞因子、FMS樣 酪氨酸激酶3配體、血紅蛋白和成纖維細胞生長因子。

4.根據(jù)權利要求3所述的用于修復卵巢功能的細胞制劑，其特征在于， 所述細胞制劑中，肝素鈉的濃度為15-20ng/ml，白介素-6的濃度為10-20ng/ml、 白介素-3的濃度為10-20ng/ml、干細胞因子的濃度為30～70ng/ml、FMS樣酪 氨酸激酶3配體的濃度為10-150ng/ml、血紅蛋白的質(zhì)量分數(shù)為1％～5％和成纖 維細胞生長因子的濃度為1-10ng/ml。

5.根據(jù)權利要求1或3所述的用于修復卵巢功能的細胞制劑，其特征在 于，所述細胞制劑還包括殼聚糖、青霉素和鏈霉素。

6.根據(jù)權利要求1所述的用于修復卵巢功能的細胞制劑，其特征在于， 所述羊膜間充質(zhì)干細胞的來源過程包括以下步驟：

無菌環(huán)境下取羊膜組織，清洗后加入胰酶細胞消化液，水浴處理，離心 后棄上清，獲得羊膜上皮細胞；用標準培養(yǎng)基重懸羊膜上皮細胞后進行培養(yǎng)， 每周換液1～3次；經(jīng)胰酶細胞消化液消化后清洗并濾干，再次消化，離心并 用所述標準培養(yǎng)基重懸細胞后進行培養(yǎng)，每周換液1～3次，當細胞融合度達 到70％以上時，進行傳代培養(yǎng)。

7.根據(jù)權利要求6所述的用于修復卵巢功能的細胞制劑，其特征在于， 所述標準培養(yǎng)基為5～20％體積分數(shù)的FBS和雙抗的DMEM培養(yǎng)基。

8.根據(jù)權利要求1所述的用于修復卵巢功能的細胞制劑，其特征在于，

所述卵巢細胞的來源過程包括以下步驟：

取卵巢組織去除紅細胞，加入膠原酶消化，吹打至組織塊充分溶解，加 入培養(yǎng)基A充分混勻，離心棄上清，重懸細胞后過濾，對濾液再次離心棄上 清，加入培養(yǎng)基B進行培養(yǎng)，每2～3天換液一次，待細胞融合度至80％以上 時，停止傳代，棄除培養(yǎng)基，清洗細胞，加入胰酶消化，待細胞變圓變亮后， 加入培養(yǎng)基A停止消化，并獲得細胞懸液，離心棄上清，重懸細胞后，加入 培養(yǎng)基B進行傳代培養(yǎng)。

9.根據(jù)權利要求8所述的用于修復卵巢功能的細胞制劑，其特征在于， 所述培養(yǎng)基A中添加有胎牛血清、青霉素和鏈霉素。

10.根據(jù)權利要求8所述的用于修復卵巢功能的細胞制劑，其特征在于， 所述培養(yǎng)基B中添加有血清替代物、非必需氨基酸、谷氨酰胺、β-二硫基乙 醇、β-FGF以及青霉素和鏈霉素。