[發(fā)明專利]視黃醇結(jié)合蛋白檢測試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201610052958.4
• 申請日: 2016-01-26
• 公開（公告）號: CN105486875A
• 公開（公告）日: 2016-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陸雪龍;宋高峰;李清華;周裕國
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波天康生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 林樂飛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是屬于醫(yī)學(xué)免疫領(lǐng)域，涉及一種免疫檢測試劑，進(jìn)一步說，本發(fā)明涉及視黃 醇結(jié)合蛋白檢測試劑盒檢測試劑盒。

背景技術(shù)

黃醇結(jié)合蛋白(RBP)測定試劑盒，該產(chǎn)品用于體外定量測定人血清中視黃醇結(jié)合 蛋白含量，作輔助診斷用。RBP主要在肝臟合成，因此血清中RBP的降低和增加與肝臟疾病有 關(guān)，并受肝臟疾病的出現(xiàn)和嚴(yán)重程度的影響。在肝病，肝硬化及急、慢性肝炎的血清RBP水平 均顯著降低。

RBP可作為腎小管損傷的早期診斷指標(biāo)。視黃醇結(jié)合蛋白RBP尿中穩(wěn)定性強，不易 分解，不受pH和血壓干擾。在腎近曲小管損傷時，其尿排量明顯增加，故尿中RBP排量增加可 作為腎近曲小管損傷的標(biāo)志物。當(dāng)腎臟濾過功能降低時，血中RBP因貯積而顯示濃度升高。 血液或尿液中的RBP濃度可以作為一種理想的腎功能指標(biāo)應(yīng)用于臨床。

診斷方法：RBP的測定一般采用RIA法、ELISA法與CLlA法、乳膠免疫比濁法等，但在 臨床上多采用乳膠免疫比濁法

血清（含RBP）+試劑（乳膠抗人RBP抗體）━━━━抗原抗體復(fù)合物產(chǎn)生濁度變化,在一 定的波長下檢測,其濁度的變化與其含量成正相關(guān)。

目前抗體與乳膠的連接通常使用化學(xué)偶聯(lián)法，其作為R2試劑，非常容易發(fā)生聚結(jié)， 使得試劑質(zhì)量隨著存放時間的延長而下降。使試劑的穩(wěn)定性差。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明根據(jù)R2試劑穩(wěn)定性不佳，提供了一種方法來克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，使得其 保持質(zhì)量穩(wěn)定，提供了一種靈敏度高，穩(wěn)定性好的視黃醇結(jié)合蛋白檢測試劑盒。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：

一種視黃醇結(jié)合蛋白檢測試劑盒，所述的試劑盒包括試劑R1、試劑R2，所述的試劑R1為 適當(dāng)?shù)木彌_液；

所述的試劑R2是用視黃醇結(jié)合蛋白抗體致敏聚苯乙烯膠乳顆粒置于緩沖液中，所述試 劑R2的制備步驟包括：

步驟(1)：在帶有羧基的聚苯乙烯膠乳顆粒(膠乳)中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亞 胺(EDAC)，得到激活的膠乳顆粒；

步驟(2)：將步驟(1)激活的膠乳顆粒和視黃醇結(jié)合蛋白抗體混合，待反應(yīng)結(jié)束后再加 入葡萄糖封閉膠乳微球上未反應(yīng)的基團，得到偶聯(lián)抗體的膠乳微球即視黃醇結(jié)合蛋白抗體 致敏聚苯乙烯膠乳顆粒，置于緩沖液中。

作為進(jìn)一步優(yōu)選：步驟(2)中視黃醇結(jié)合蛋白抗體致敏聚苯乙烯膠乳顆粒在試劑 R2中的濃度為0.08～0.28克/100ml。

作為進(jìn)一步優(yōu)選：所述試劑R1中的緩沖液為PBS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩 沖液、醋酸鹽緩沖液、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液、2-嗎啉乙磺酸(MES) 緩沖液緩沖液中至少一種。

作為進(jìn)一步優(yōu)選：所述試劑R2中的緩沖液為PBS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩 沖液、醋酸鹽緩沖液、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液、2-嗎啉乙磺酸(MES) 緩沖液緩沖液中至少一種。

作為進(jìn)一步優(yōu)選：步驟(1)中乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺∶聚苯乙烯膠乳顆粒的 重量比為0.5～5∶100。

作為進(jìn)一步優(yōu)選：所述視黃醇結(jié)合蛋白抗體包括多克隆抗體或單克隆抗體。

作為進(jìn)一步優(yōu)選：所述步驟（1）中的聚苯乙烯膠乳顆粒其平均粒徑在0.01~0.2mm 之間。

本發(fā)明所述試劑盒所采用的檢測原理為膠乳增強免疫透射比濁法，其原理是視黃 醇結(jié)合蛋白抗體的膠乳顆粒，與視黃醇結(jié)合蛋白發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成聚集顆粒，在一定波 長下，通過測定聚集物形成所產(chǎn)生的濁度，即可測出視黃醇結(jié)合蛋白的含量。

本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果：

1.本發(fā)明的試劑盒具有檢測簡單而快速、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、抗干擾能力強及生產(chǎn)成 本低的優(yōu)點。

2.本發(fā)明采用的視黃醇結(jié)合蛋白檢測方法為膠乳增強免疫比濁法，該方法使得視 黃醇結(jié)合蛋白的檢測更為經(jīng)濟、方便和快速，適用于絕大多數(shù)醫(yī)院的自動生化分析儀，特別 是對急診能實現(xiàn)快速定量檢測。

具體實施方式

下面通過實施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明，但本發(fā)明不僅僅局限于以下實施例。

本發(fā)明的試劑盒涉及試劑的主要原材料如下：

1.視黃醇結(jié)合蛋白抗體：多克隆抗體(市售)。