[發明專利]基于DC的腫瘤治療性疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201610052915.6
• 申請日: 2016-01-26
• 公開（公告）號: CN105617371A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 曾憲卓;魯菲
• 申請（專利權）人: 深圳愛生再生醫學科技有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61P35/00;C12N5/0784
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物工程和生物醫藥領域，特別涉及一種基于DC的腫瘤治 療性疫苗及其制備方法。

背景技術

腫瘤是來源于神經上皮的腫瘤，是顱內最常見的惡性腫瘤，約占全部顱 內腫瘤的40-50％，以發病率高、復發率高、致死率高，成為腫瘤治療的難題。 傳統治療方法主要是手術和放化療來提高患者的生存機率。但是位于重要功 能區的膠質瘤很難做到全切除。放射治療幾乎是各型膠質瘤的常規治療，但 療效評價不一，除髓母細胞瘤對放療高度敏感，室管膜瘤中度敏感外，其他 類型對放療均不敏感。化療藥物限于血腦屏障及藥物的毒副作用，療效尚不 肯定。近年來，免疫治療成為腦膠質瘤繼手術、放化療后的有效治療手段。 與其他方式聯合應用，具體有很強的互補作用，對患者受損的免疫系統能夠 起到恢復與重建的獨特療效，從而進一步防止腫瘤的復發和轉移。

目前現有技術中，普遍采用腫瘤細胞滅活后刺激DC細胞，該種方法制 備的DC治療性疫苗有許多缺陷，如：由于腫瘤細胞攜帶的抗原信息相對于攜 帶腫瘤全面抗原信息的多種腫瘤細胞分秘釋放到細胞外的基質來說不夠完善 且全面，因此導致了引發的免疫反應較弱，殺瘤能力不強等問題。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，針對現有技術中腫瘤疫苗存在免疫反應 弱、殺瘤能力差等缺陷，提供一種免疫原性及特異性強的基于DC的腫瘤治療 性疫苗及其制備方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：提供一種基于DC的腫瘤 治療性疫苗的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

獲取未成熟DC；

加入腫瘤細胞分泌的膜囊泡與未成熟DC于培養基中進行共培養；

再加入腫瘤壞死因子-α和白介素-1繼續培養2～4天，至DC成熟且負載 有所述膜囊泡。

在本發明提供的基于DC的腫瘤治療性疫苗的制備方法中，所述DC的濃 度為(2～5)×10⁵個/ml。

在本發明提供的基于DC的腫瘤治療性疫苗的制備方法中，所述DC的獲 取過程包括以下步驟：

取外周血，稀釋后加入淋巴細胞分離液和抗凝血，離心后取白色渾濁層， 離心棄上清，即分離出單個核細胞，加入體外誘導培養液對單個核細胞進行 培養48～96小時，半量換液，至單個核細胞誘導分化成DC。

在本發明提供的基于DC的腫瘤治療性疫苗的制備方法中，所述體外誘導 培養液為含有5％～15％胎牛血清、粒-巨噬細胞和白介素-4的基礎培養基。

在本發明提供的基于DC的腫瘤治療性疫苗的制備方法中，所述膜囊泡的 濃度為100～400μg/ml。

在本發明提供的基于DC的腫瘤治療性疫苗的制備方法中，所述腫瘤細胞 分泌的膜囊泡的獲取過程包括以下步驟：

取腫瘤細胞進行傳代培養至細胞融合至80％以上時，去除培養基后，進 行清洗，消化至細胞變圓，補充培養基，進行培養；待細胞長至80％以上時， 傾去培養基，加入無血清培養基，12～36小時后收集培養基上清，離心，過濾， 取濾液再次離心后，加入去離子水進行超濾離心，提取超濾后的濃縮液，即 收獲膜囊泡。

在本發明提供的基于DC的腫瘤治療性疫苗的制備方法中，所述膜囊泡細 胞與未成熟DC共培養時所采用的培養基為含有粒-巨噬細胞因子和白介素-4 的基礎培養基。

在本發明提供的基于DC的腫瘤治療性疫苗的制備方法中，所述腫瘤壞死 因子-α在培養基中的終濃度為1-10ng/ml、白介素-1在培養基中的終濃度為 5-15ng/ml。

在本發明提供的基于DC的腫瘤治療性疫苗的制備方法中，所述腫瘤細胞 為胰腺癌、肺癌、乳腺癌、胃癌或肝癌腫瘤細胞。

本發明還提供一種基于DC的腫瘤治療性疫苗，由上述基于DC的腫瘤治 療性疫苗制備方法所獲得。

實施本發明提供的基于DC的腫瘤治療性疫苗及其制備方法，可以達到以 下有益效果：通過本發明獲得的基于DC的腫瘤治療性疫苗不僅性狀較穩定， 而且免疫原性及特異性較強，殺瘤能力較強，能夠很好的調節腫瘤的機體免 疫機制，改善腫瘤引起的肝臟免疫耐受的現象。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例， 對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅用以 解釋本發明，并不用于限定本發明。