[發明專利]用于烏菜無菌苗培養的種子消毒方法

在審

• 申請號: 201610052717.X
• 申請日: 2016-01-25
• 公開（公告）號: CN105594342A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發明（設計）人: 汪承剛;張盛云;陳國戶;袁凌云;朱世東;劉思嘉;方柔
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A01C1/08
• 分類號: A01C1/08;A01H4/00
• 代理公司: 北京市京大律師事務所 11321
• 代理人: 劉向輝;王凝

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體地說，涉及用于烏菜無 菌苗培養的種子消毒方法。

背景技術

隨著分子生物技術研究的快速發展，通過轉基因方法提高蔬菜抗 性和產量成為改良蔬菜品質的最佳途徑。無菌苗的培養是組織培養和 轉基因研究能否有效進行的前提。許多研究者對種子的消毒方法進行 了大量探索。李旭嬌等(甘藍型油菜無菌苗培養方法的優化，李旭嬌， 田保明，范興福，師恭耀，宋錚，裴振強，王伯楠，孫丹丹，高樹廣， 河南農業科學，2009年)對甘藍型油菜種子的消毒方法進行研究，結 果表明以70％酒精表面消毒0.5-1min后，用0.1％HgCl₂消毒10min效 果最好。但HgCl₂為劇毒試劑，在試驗中產生廢水處理較困難，直接 排放會污染環境，因此不提倡使用HgCl₂進行種子滅菌消毒。烏菜為 十字花科蕓薹屬白菜亞種的一個變種，目前，針對烏菜無菌苗培養前 的種子消毒方法尚未建立一套科學、系統、安全、環境友好型的消毒 方法，且不影響種子的發芽率。

發明內容

本發明旨在提供一種可以提高種子的發芽率的，用于烏菜無菌苗 培養的種子消毒方法。

為了實現本發明目的，本發明提供的用于烏菜無菌苗培養的種子 消毒方法，將烏菜種子用清水沖洗20-30min(優選30min)后。置于 75％酒精中浸泡消毒30-120s，然后用無菌水沖洗2-4遍(優選3遍)， 再用1-8％次氯酸鈉溶液浸泡消毒5-12min，最后用無菌水沖洗2-4遍 (優選3遍)，即完成種子消毒。

優選地，將烏菜種子用清水沖洗30min后。置于75％酒精中浸泡 消毒30s，然后用無菌水沖洗3遍，再用8％次氯酸鈉溶液浸泡消毒5 min，最后用無菌水沖洗3遍，即完成種子消毒。

更優選地，將烏菜種子用清水沖洗30min后。置于75％酒精中浸 泡消毒30s，然后用無菌水沖洗3遍，再用1％次氯酸鈉溶液浸泡消毒5 min，最后用無菌水沖洗3遍，即完成種子消毒。

最優選地，將烏菜種子用清水沖洗30min后。置于75％酒精中浸 泡消毒30s，然后用無菌水沖洗3遍，再用2％次氯酸鈉溶液浸泡消毒5 min，最后用無菌水沖洗3遍，即完成種子消毒。

本發明進一步提供所述種子消毒方法在烏菜無菌苗培養中的應 用。

所述應用是將消毒后的烏菜種子接種于MS培養基中，于25℃培 養。

本發明基于烏菜無菌苗種子常規消毒方法進行三因素四水平的 正交試驗設計。三因素為75％酒精消毒時間、次氯酸鈉溶液濃度、次 氯酸鈉溶液消毒時間，各因素下的水平分別為30s、60s、90s、120s (75％酒精消毒時間)；1％、2％、5％、8％(次氯酸鈉溶液濃度)；5min、 8min、10min、12min(次氯酸鈉溶液消毒時間)。

在種子消毒后，用槍頭鑷將其接種于MS培養基中培養5d。記錄 菌落數及種子發芽數，以消毒種子的帶菌率表示消毒效果，計算發芽 率，并進行方差分析。

結果表明：(1)75％酒精浸泡30s后，用8％次氯酸鈉溶液消毒5 min，可以降低烏菜種子的帶菌率，提高種子的消毒效果；(2)75％ 酒精浸泡30s后，用1％次氯酸鈉溶液消毒5min，可以提高烏菜種子 的發芽率；(3)75％酒精浸泡30s后，用2％次氯酸鈉溶液消毒5min， 既可以降低烏菜種子的帶菌率，提高消毒效果，又可以保證烏菜種子 的發芽率。

本發明基于烏菜無菌苗種子常規消毒方法進行三因素四水平的 正交試驗設計，確定了75％酒精的最佳消毒時間以及次氯酸鈉溶液的 最佳濃度和最佳消毒時間，降低種子的帶菌率，同時保證較高的發芽 率，有利于后續烏菜無菌苗培養技術的深入研究。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。若未 特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規 手段，所用原料均為市售商品。

實施例1烏菜無菌苗種子消毒方法的研究