[發明專利]一種基于多肽識別基團的熒光探針、其制備方法及其對銅離子與氰根離子的檢測方法

有效

• 申請號: 201610052227.X
• 申請日: 2016-01-27
• 公開（公告）號: CN105542755B
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發明（設計）人: 周彬彬
• 申請（專利權）人: 湖南省食品質量監督檢驗研究院
• 主分類號: C07K5/083
• 分類號: C07K5/083;C09B57/02;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 長沙楚為知識產權代理事務所(普通合伙)43217
• 代理人: 李大為,于海東

1.一種制備基于多肽識別基團 的熒光探針的方法，其特征在于：

所述熒光探針的探針分子化合物結構通式如下：

上述結構通式中，R₁、R₂各自獨立選自具有1至8個碳原子的烷基鏈的的任一種，R₃選自氫、氯、溴、碘、羥基、甲氧基或乙氧基中的任一種；

將香豆素-3-羧酸骨架溶解在良性有機溶劑中，加入羧基、氨基偶聯試劑進行活化反應，然后加入三肽物質反應，再向反應體系中加入不良溶劑使產物沉淀出來，將沉淀用高效液相色譜分離得到探針分子化合物，

其中，所述香豆素-3-羧酸骨架結構通式如下：

所述香豆素-3-羧酸骨架的5位取代基R₃選自氫、氯、溴、碘、羥基、甲氧基或乙氧基中的任一種，7位取代N的連接基團R₁、R₂各自獨立選自具有1至8個碳原子的烷基鏈的任一種；

所述三肽物質由兩個甘氨酸與一個組氨酸組成，其結構如下所示：

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述良性有機溶劑選自NMP、DMF或THF中的一種，所述羧基、氨基偶聯劑選自DIC、DCC、HOBt、HBTU中的一種或兩種，所述不良溶劑選自乙醚、甲醚或石油醚中的一種。

3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于：反應溫度為20-50℃，反應時間為1-24h。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述香豆素-3-羧酸骨架的濃度為1-10mM，所述羧基、氨基偶聯劑的濃度為1-10mM，所述三肽物質的濃度為1-10mM。

5.如權利要求1-4任一項所述的制備方法，其特征在于：步驟如下：

將7-二乙胺基香豆素-3羧酸溶解于DMF中，加入DIC與HOBt進行活化，然后加入三肽進行偶聯反應，再向反應體系中加入乙醚使產物沉淀出來，將沉淀用高效液相色譜分離純化得到探針分子化合物。

6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于：步驟如下：

(1)將7-二乙胺基香豆素-3羧酸溶解于DMF中，25℃的室溫下攪拌溶解，然后加入DIC和HOBt偶聯試劑，繼續攪拌活化反應1h，用薄層色譜監測反應進程，待原料反應完畢生成活化中間體；

(2)在上述溶液中緩慢滴加含有三肽Gly-Gly-His的DMF溶液，在2h時間內滴加完畢，反應繼續進行3h，用薄層色譜監測反應進程，待原料反應完畢，向反應溶液體系中加入冰乙醚，-4℃下冷凍離心收集沉淀產物，用高效液相色譜分離得到純的探針化合物；

其中，7-二乙胺基香豆素-3羧酸用量2mmol，DIC用量2mmol，HOBt用量2mmol，三肽Gly-Gly-His用量2mmol，DMF量20mL，冰乙醚用量80mL。