[發明專利]水貂γ-干擾素單克隆抗體及其在檢測水貂γ-干擾素中的應用

有效

• 申請號: 201610051421.6
• 申請日: 2016-01-26
• 公開（公告）號: CN105602908B
• 公開（公告）日: 2020-02-14
• 發明（設計）人: 張海玲;閆喜軍;張蕾;趙建軍;張東亮;劉昊;胡博;白雪;史寧;朱言柱;徐淑娟
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院特產研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/24;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 11139 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一種水貂γ?干擾素單克隆抗體及其在檢測水貂γ?干擾素中的應用。在本發明中，所述的水貂γ?干擾素單克隆抗體由保藏號為CGMCC No.10953的雜交瘤細胞株分泌產生，研究表明由該雜交瘤細胞株分泌產生的單克隆抗體能夠同時識別原核表達產物和真核表達產物，且與天然IFN?γ的結合效價高，特異性好。此外，本發明還公開了一種以篩選的特異性單抗為包被抗體，多抗為檢測抗體建立的夾心ELISA檢測方法，實驗證明該方法靈敏度、準確率高，特異性良好。因此，本發明的提出對于對水貂病毒感染及疫苗免疫后機體細胞免疫水平的評價以及特種動物的疫病防控具有重要意義。

技術領域

本發明涉及一種水貂γ-干擾素單克隆抗體的制備，還涉及一種檢測水貂γ-干擾素的ELISA檢測方法。本發明屬于生物技術領域。

背景技術

大多數細胞因子是免疫應答的產物，在動物和人體內可發揮免疫學效應，最終通過上調免疫細胞對抗原物質的免疫應答，介導炎癥反應而清除抗原物質。抗原刺激和病原微生物感染均可誘導體內產生細胞因子，因此細胞因子與疾病的發生、發展有著密切的關系，它們可參與疾病的發生、發展。因此細胞因子在疾病的診斷、治療、預防等方面有著廣泛的應用。

細胞因子可以導致和/或促進某些疾病的發生，病原微生物感染可誘導某些細胞因子過量產生，高濃度細胞因子可加劇感染癥狀，因此臨床上通過檢測一些細胞因子可以對疾病進行診斷。近年來，動物細胞因子的研究也越來越受到重視，采用基因工程技術開發出一些重組細胞因子產品(如干擾素)。其主要應用表現在：通過檢測細胞因子水平來評價動物機體的免疫功能狀態，其次也可以研究細胞因子在病原微生物感染，特別是一些持續性感染疾病、免疫抑制性疾病中的作用和地位。

干擾素(interferon，IFN)是1957年最早發現的細胞因子，因其能干擾病毒感染而得名。干擾素(IFN)等細胞因子可誘導APC表達MHCⅡ類分子，從而促進抗原遞呈作用。30年前，IFN-γ最早被發現，于1982年被克隆。其僅由NK細胞、CD8+T細胞和CD4+T細胞Th1亞群產生，通過廣泛表達的特異性受體(除了紅細胞上不表達)發揮作用，血小板上也表達IFN-γ受體，為IFN-γ在血循環中的運輸增加了可能性。

Th1細胞分泌IL-2，IFN-γ及淋巴毒素，Th1細胞功能與細胞介導的免疫應答(炎癥反應，遲發型超敏反應及細胞毒作用)相關。與TDTH細胞、TC細胞增殖、分化、成熟有關，因此Th1細胞可促進細胞介導的免疫應答，其中IFN-γ是細胞免疫狀態監測的重要指標。因此，檢測IFN-γ轉錄因子水平，可以間接地反映出IFN-γ基因表達水平，從而為研究Th1細胞分化及其在自身免疫性疾病，病毒感染中的作用有著重要的臨床和科研意義。

對樣本中的IFN-γ進行定量分析，在免疫機制研究、免疫功能分析、疫苗免疫效果評估、器官移植、過敏反應以及多種胞內病原感染的診斷等方面都具有極其重要的理論價值和應用價值。評價IFN-γ在機體內的動態變化水平指標，對于了解傳染性疾病的發生、發展、轉歸情況及其機體保護性免疫反應動態規律提供較大幫助。因此，建立評價IFN-γ在機體中水平變化的檢測方法顯得十分重要。

近年來，我國水貂、狐貍和貉對犬瘟熱，細小病毒和阿留申病毒混合感染趨勢上升，而傳統疫苗免疫后保護率下降時有發生，這些是什么原因導致的，除了病毒的不斷變異外，了解動物機體的免疫狀態，也為免疫程序的優化及免疫時間的選擇提供依據。因此，本發明的提出為開發具有自主知識產權的新型檢測方法對于我國特種動物疫病防控具有深刻的現實意義與廣闊的應用前景。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是應用雜交瘤技術獲得穩定分泌抗水貂γ-干擾素單克隆抗體的雜交瘤細胞株，同時建立水貂γ-干擾素的檢測方法，從而為水貂γ-干擾素的檢測提供一種新的技術手段，也為研究機體的免疫狀態及免疫機制提供技術平臺。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：