[發明專利]脂蛋白a(Lp(a))測定試劑盒

在審

• 申請號: 201610050618.8
• 申請日: 2016-01-26
• 公開（公告）號: CN105675891A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 陸雪龍;宋高峰;李清華;周裕國
• 申請（專利權）人: 寧波天康生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 林樂飛

技術領域

本發明是屬于醫學免疫領域，涉及一種免疫檢測試劑，進一步說，本發明涉及脂蛋 白a(Lp(a))測定試劑盒檢測試劑盒。

背景技術

脂蛋白a測定試劑盒，該產品用于體外定量測定人血清中脂蛋白(a)（Lp(a)）含量， 作輔助診斷用。脂蛋白(a)是一種獨特的脂蛋白，脂質組成結構與LDL極其相似，因含有特殊 的載脂蛋白(a)而得名。1987年發現脂蛋白(a)的一級結構與纖溶酶原具有顯著同源性，其 增高有導致血栓形成的傾向。Lp(a)體內水平高低與血脂、載脂蛋白不相關，是動脈粥樣硬 化性心腦疾病的重要的獨立危險因素。對冠心病、急性心梗的發病、病程變化以及轉歸極具 診斷價值。

診斷方法：Lp(a)的測定一般采用RIA法、ELISA法與CLlA法、乳膠免疫比濁法等，但 在臨床上多采用乳膠免疫比濁法

血清（含Lp(a)）+試劑（乳膠抗人Lp(a)抗體）━━━━抗原抗體復合物

產生濁度變化,在一定的波長下檢測,其濁度的變化與其含量成正相關。

目前抗體與乳膠的連接通常使用化學偶聯法，其作為R2試劑，非常容易發生聚結， 使得試劑質量隨著存放時間的延長而下降。使試劑的穩定性差。

發明內容

本發明根據R2試劑穩定性不佳，提供了一種方法來克服現有技術的不足，使得其 保持質量穩定，提供了一種靈敏度高，穩定性好的脂蛋白a(Lp(a))檢測試劑盒。

為實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：

一種脂蛋白a(Lp(a))測定試劑盒，所述的試劑盒包括試劑R1、試劑R2，所述的試劑R1為 適當的緩沖液；

所述的試劑R2是用Lp(a)抗體致敏聚苯乙烯膠乳顆粒置于緩沖液中，所述試劑R2的制 備步驟包括：

步驟(1)：在帶有羧基的聚苯乙烯膠乳顆粒(膠乳)中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亞 胺(EDAC)，得到激活的膠乳顆粒；

步驟(2)：將步驟(1)激活的膠乳顆粒和Lp(a)抗體混合，待反應結束后再加入葡萄糖封 閉膠乳微球上未反應的基團，得到偶聯抗體的膠乳微球即Lp(a)抗體致敏聚苯乙烯膠乳顆 粒，置于緩沖液中。

作為進一步優選：步驟(2)中Lp(a)抗體致敏聚苯乙烯膠乳顆粒在試劑R2中的濃度 為0.08～0.28克/100ml。

作為進一步優選：所述試劑R1中的緩沖液為PBS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩 沖液、醋酸鹽緩沖液、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液、2-嗎啉乙磺酸(MES) 緩沖液緩沖液中至少一種。

作為進一步優選：所述試劑R2中的緩沖液為PBS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩 沖液、醋酸鹽緩沖液、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液、2-嗎啉乙磺酸(MES) 緩沖液緩沖液中至少一種。

作為進一步優選：步驟(1)中乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺∶聚苯乙烯膠乳顆粒的 重量比為0.2～5∶100。

作為進一步優選：所述Lp(a)抗體包括多克隆抗體或單克隆抗體。

作為進一步優選：所述步驟（1）中的聚苯乙烯膠乳顆粒其平均粒徑在0.01~0.2mm 之間。

本發明所述試劑盒所采用的檢測原理為膠乳增強免疫透射比濁法，其原理是Lp (a)抗體的膠乳顆粒，與Lp(a)發生免疫反應后，形成聚集顆粒，在一定波長下，通過測定聚 集物形成所產生的濁度，即可測出Lp(a)的含量。

本發明的優點和有益效果：

1.本發明的試劑盒具有檢測簡單而快速、靈敏度高、準確性好、抗干擾能力強及生產成 本低的優點。

2.本發明采用的Lp(a)檢測方法為膠乳增強免疫比濁法，該方法使得Lp(a)的檢測 更為經濟、方便和快速，適用于絕大多數醫院的自動生化分析儀，特別是對急診能實現快速 定量檢測。

具體實施方式

下面通過實施例進一步詳細描述本發明，但本發明不僅僅局限于以下實施例。

實施例1：Lp(a)檢測試劑盒的制備

本發明的試劑盒涉及試劑的主要原材料如下：

1.Lp(a)抗體：單克隆抗體(市售)。

2.膠乳：本發明僅示例性的采用直徑為80～200nm帶羧基基團的聚苯乙烯膠乳顆 粒(市售)進行實驗。