[發明專利]一種治療肝硬化的基因藥物及其制備方法

在審

• 申請號: 201610047452.4
• 申請日: 2016-01-25
• 公開（公告）號: CN105617403A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 陳光風;史秀娟;劉小青
• 申請（專利權）人: 蘇州佰通生物科技有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K38/48;A61P1/16;C12N15/864
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所 44268
• 代理人: 王永文;劉文求

技術領域

本發明涉及基因藥物領域，尤其涉及一種治療肝硬化的基因藥物及其制備方法。

背景技術

肝硬化是臨床常見的慢性、疑難性疾病，在我國是一種發生較為廣泛的疾病。肝硬 化在病理組織學上的表現為殘存干細胞結節性再生、廣泛的干細胞壞死、結締組織增生與 纖維隔形成，最終導致肝小葉結構破壞和假小葉形成，肝臟逐漸變形、變硬而發展為肝硬 化。在肝硬化早期，由于肝臟的代償功能較強，因此患者感覺不到明顯的癥狀。肝硬化在后 期則以肝功能損害和門脈高壓為主要表現，并有多系統受累。肝硬化在晚期時，長出現繼發 感染、脾功能亢進、上消化道出血、肝性病腦腹水、甚至導致癌變等并發癥。

肝硬化按照病因可以分為多種類型，比如包括病毒性肝炎肝硬化、酒精性肝硬化、 寄生蟲肝硬化、代理性肝硬化、肝靜脈回流受阻性肝硬化、自身免疫性肝硬化、膽汁淤積性 肝硬化、營養不良性肝硬化、毒物和藥物性肝硬化、隱源性肝硬化等。在我國，大部分肝硬化 為病毒性肝炎肝硬化，其次為酒精性肝硬化和寄生蟲肝硬化等。

其中，病毒性肝炎肝硬化是指病毒性肝炎發展至后期形成的肝硬化。現已知肝炎 病毒有甲乙丙丁戊等類型。而研究表明，乙型肝炎和丙型肝炎容易轉成慢性肝炎，繼而進一 步轉變為肝硬化。而甲型肝炎及戊型肝炎不易形成肝硬化。酒精性肝硬化主要是由于長期 大量酗酒引起的。寄生蟲肝硬化如血吸蟲或肝吸蟲等蟲體在門脈系統寄居，蟲卵隨門脈血 流沉積于肝臟內，引起門靜脈小分支栓塞而形成。

然而，肝硬化是因為組織結構紊亂而致肝功能障礙，目前肝硬化的治療手段非常 有限，無法根治，主要的治療方法在于早期發現和阻止病程進展。根據肝硬化病情的逐漸發 展，其治療方法有早期篩查、控制飲食、支持治療、病因特異性治療、服用降低門靜脈壓力藥 物、腹腔積液治療、肝移植等治療方式。

對肝硬化治療而言，早期的篩查尤為重要，可以通過早期越早的診斷，越早采用相 應的治療措施。在診斷為肝硬化之后，可以通過控制飲食來進一步延緩肝硬化的發展。支持 治療主要是指靜脈輸入高滲葡萄糖液以補充熱量，以及胰島素、氯化鉀、維生素C電解質等 緩解肝硬化的進一步發展。病因特異性治療主要是指根據引起肝硬化的原因的不同而采取 不同的輔助治療方法，比如主要由肝炎病毒引起的肝硬化，就需要利用抗病毒藥物治療，以 便減輕或者減緩肝硬化。對于肝硬化的藥物治療而言，目前并沒有有效的藥物可以用來直 接治療肝硬化，多數藥物是用來降低肝門靜脈壓力的，比如心得安、鈣離子通道阻滯劑等。 肝硬化晚期患者會有大量的腹腔積液，因此，還會根據患者病情采用利尿劑治療、提高血漿 滲透壓等方法減少腹腔積液。肝硬化到了晚期發展為肝癌、肝衰竭等，通過肝臟移植的方法 可以取得較好的治療效果，然而肝臟捐獻數量極其稀少、費用及其昂貴，無法滿足需求。

目前的治療肝硬化的方法基本上都是間接延緩肝衰竭的發展，而不能夠根治。因 此，目前對于廣泛發病的肝硬化而言，缺少有效的直接治療手段，亟待開發新的治療肝硬化 的藥物。

因此，現有的治療肝硬化的技術還有待改進和開發。

發明內容

鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種治療肝硬化的基因藥物及 其制備方法，旨在解決現有技術無法直接治療肝硬化的問題。。

本發明的技術方案如下：

一種治療肝硬化的基因藥物，其中，其活性成分是以腺相關病毒為出發載體構建的攜 帶有表達基質金屬蛋白酶的重組腺相關病毒載體。

所述的一種治療肝硬化的基因藥物，其中，所述腺相關病毒為2型腺相關病毒，包 括AAV2/1、AAV2/2、AAV2/3、AAV2/4、AAV2/5、AAV2/6、AAV2/7、AAV2/8和AAV2/9。

所述的一種治療肝硬化的基因藥物，其中，所述基質金屬蛋白酶包括MMP-1、MMP- 2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14和MMP-15。

所述的一種治療肝硬化的基因藥物，其中，所述基質金屬蛋白酶為其活性結構域 部分。

所述的治療肝硬化的基因藥物的制備方法，其中，包括步驟：

A、構建重組質粒：采用EcoRI和BamHI對AAV載體進行雙酶切，將酶切后的AAV載體與 合成的編碼基質金屬蛋白酶的核苷酸序列按照摩爾比例1:10混合，再加入T4DNA連接酶 buffer溶液，制得重組質粒；