[發(fā)明專利]一種金線蓮組培苗的壯苗增重方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610046857.6
• 申請日: 2016-01-25
• 公開（公告）號: CN105660400B
• 公開（公告）日: 2018-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖藝;周芳;肖長錦;肖長紀(jì);肖青;李振達(dá)
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波易中禾生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務(wù)所(普通合伙)33226
• 代理人: 謝瀟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種金線蓮組培苗的壯苗增重方法。

背景技術(shù)

金線蓮為蘭科花葉開唇蘭屬多年生草本植物，別名金線蘭、金石松、金線入骨消等。在我國主要分布在福建、中國臺灣、廣東、廣西、浙江、江西等地。金線蓮具有養(yǎng)肝護(hù)肝、清熱解毒、降三高、抗菌抗癌等功效，民間素有“藥王”之稱。由于其種子構(gòu)造特殊、種子微小無胚乳，野外自然萌發(fā)率極低，加之自然生態(tài)環(huán)境的破壞和人為瘋狂采挖，導(dǎo)致野生金線蓮已瀕臨滅絕。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，目前金線蓮組培育苗技術(shù)已取得一定突破，通過組織培養(yǎng)可以獲得金線蓮的組培苗，但是目前各生產(chǎn)廠家技術(shù)良莠不濟，往往需要經(jīng)過誘導(dǎo)、壯苗、生根等培養(yǎng)基頻繁轉(zhuǎn)接，導(dǎo)致成本居高不下，例如中國專利CN101715732A公開了一種通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)中國臺灣金線蓮的方法，通過誘導(dǎo)培養(yǎng)基和大規(guī)模培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，從工業(yè)生產(chǎn)角度看，該方法工序繁瑣、成本偏高，不利于大面積產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。并且，現(xiàn)有的金線蓮組培育苗技術(shù)，因采用的培養(yǎng)基營養(yǎng)成份、培養(yǎng)過程中方法單一等問題，導(dǎo)致生產(chǎn)出的組培苗相對瘦弱、幼嫩，得到的組培苗的平均單株鮮重僅為1.2克左右，影響金線蓮組培苗的品質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡單、不需要進(jìn)行反復(fù)轉(zhuǎn)接的金線蓮組培苗的壯苗增重方法。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種金線蓮組培苗的壯苗增重方法，包括以下步驟：

（1）組培苗的準(zhǔn)備：將以野生金線蓮為外植體經(jīng)脫毒后獲得的繼代次數(shù)在3-6次的無菌母苗作為組培苗；

（2）綜合培養(yǎng)基的配制：以MS培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，以該基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積計，向該基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加下列添加物：萘乙酸0.6-1.2mg/L、活性炭0.5-0.7 g/L、6-芐氨基腺嘌呤0.05-0.3 mg/L、花寶一號0.5-1.0 g/L、花寶三號0.2-0.6 g/L、蛋白胨0.3-0.8 g/L、去皮香蕉30-50 g/L、去皮馬鈴薯40-60 g/L、去皮大蒜10-20 g/L、蔗糖25-35 g/L和瓊脂6.0-6.5 g/L，得到綜合培養(yǎng)基，并將該綜合培養(yǎng)基的pH值調(diào)至5.5~6.2，之后將配制的綜合培養(yǎng)基分裝到帶透氣孔的650 mL組培瓶中，每個組培瓶的灌液深度為2.5-3.5 cm，然后將各個組培瓶在高壓滅菌鍋內(nèi)于121 ℃滅菌21-24 min，冷卻后備用；

（3）組培苗的無菌接種：在無菌條件下將步驟（1）中準(zhǔn)備的組培苗去葉，切成每段含有1個莖節(jié)的莖段，每個組培瓶內(nèi)接種18-22個莖段；

（4）組培苗的培養(yǎng)：組培苗無菌接種后，先將各個組培瓶于22-24 ℃下暗處理5-7天，然后在溫度為23-24 ℃且每日光照強度800-1500 Lux、光照時間11-12 h的培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)28-32天，之后在溫度為26-27 ℃且每日光照強度1800-3000 Lux、光照時間12-13 h的培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)58-62天，最后在溫度為20-24 ℃且每日光照強度3000-5000 Lux、光照時間10-11 h的培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)48-52天，生根，即得到健壯的金線蓮組培苗。

作為優(yōu)選，步驟（2）中，將綜合培養(yǎng)基的pH值調(diào)至5.5~5.8，以確保組培苗的正常生長。

MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基是目前使用最普遍的培養(yǎng)基，其組成包括大量元素、微量元素、鐵鹽、有機成分、肌醇等等，可以自制或者選擇市售產(chǎn)品。花寶一號、花寶三號和蛋白胨均可選擇市售產(chǎn)品。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：本發(fā)明金線蓮組培苗的壯苗增重方法，操作簡單，經(jīng)過一次性誘導(dǎo)綜合培養(yǎng)基接種組培苗，并根據(jù)金線蓮野外生長特性，通過培養(yǎng)溫度、光照強度、光照周期的控制培養(yǎng)組培苗，培養(yǎng)得到健壯老練的高品質(zhì)金線蓮組培苗。本發(fā)明通過一個綜合培養(yǎng)基即可完成對組培苗的誘導(dǎo)、壯苗和生根過程，不需要進(jìn)行反復(fù)的轉(zhuǎn)接，可大幅降低人工成本投入。本發(fā)明方法配制的綜合培養(yǎng)基以天然抑菌添加物為主，無有害化學(xué)成分添加，能夠有效降低金線蓮組培污染率。本發(fā)明方法可顯著提高金線蓮組培苗的粗壯度，經(jīng)本發(fā)明方法培養(yǎng)得到的金線蓮組培苗的平均單株鮮重為1.9克左右。

具體實施方式

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。

實施例1的金線蓮組培苗的壯苗增重方法，包括以下步驟：

（1）組培苗的準(zhǔn)備：將以野生金線蓮為外植體經(jīng)脫毒后獲得的繼代次數(shù)在3次的無菌母苗作為組培苗；