[發明專利]一種基于HPLC的青錢柳中黃酮類化合物含量的檢測方法

在審

• 申請號: 201610046707.5
• 申請日: 2016-01-22
• 公開（公告）號: CN105675755A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 楊琴;付廷明;武俊明
• 申請（專利權）人: 江蘇中興藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 黃天天

技術領域

本發明涉及一種利用高效液相色譜法(HPLC)測定植物體中黃酮類化合物藥物的方法，尤其涉及一種基于HPLC的青錢柳中黃酮類化合物含量的檢測方法。

背景技術

青錢柳是雙子葉植物綱(Dicotyledoneae)胡桃科(Juglandaceae)青錢柳屬植物，是我國獨有的單種屬植物，也是國家重點保護的瀕危植物之一。《中國中藥資源志要》記載，青錢柳葉具清熱消渴解毒之功效。現代科學實驗發現青錢柳葉含多糖、三萜、皂苷、黃酮等多種重要藥效成分，能增強人體免疫力，抗氧化，抗衰老，保肝脂肪肝，具有獨特作用，尤其對糖尿病人群有顯著降血糖的功效。目前青錢柳主要以保健茶的形式在市場上銷售，對于其質量缺乏有效的控制方法。

發明內容

發明目的：青錢柳中黃酮類化合物以槲皮素與山柰素為主，本發明的目的是提供一種能有效控制產品質量的基于HPLC的青錢柳中黃酮類化合物的含量檢測方法。

技術方案：為解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是：一種基于HPLC的青錢柳中黃酮類化合物的含量檢測方法，該方法包括如下步驟：

(1)對照品溶液的制備：精密稱取槲皮素對照品和山柰素對照品適量，以80％甲醇為溶劑制備成每1ml分別含10μg槲皮素和20μg山柰素的對照品混合溶液，；

(2)供試品溶液的制備：精密稱定青錢柳粉末1.5g，置具塞錐形瓶中，精密加80％甲醇50ml，密塞，稱定重量，置熱水浴中加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用80％甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精密量取濾液25ml，精密加入鹽酸5ml，搖勻，置熱水浴中加熱回流1小時，取出，迅速冷卻，轉移至50ml量瓶中，用80％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；

(3)用高效液相色譜法測定：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4％磷酸溶液按照體積比60∶40為流動相；檢測波長為360nm；流速為1.0ml/min；理論板數按槲皮素峰計算應不低于2500；測定時分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定。

優選地，步驟(2)中，加熱回流的水浴溫度為85～95℃。

優選地，在步驟(2)中迅速冷卻是用流動水沖洗回流用容器外壁，并不斷搖晃。

有益效果：與現有技術相比，本發明通過對供試品進行特殊制備，然后用高效液相色譜法采用合適的色譜條件對青錢柳葉中的黃酮類化合物槲皮素與山柰素進行含量測定，能提高重現性，同時使檢驗結果更加可靠，從而能更好的控制產品質量。

附圖說明

圖1為槲皮素標準曲線；

圖2為山柰素標準曲線；

圖3為混合對照品圖譜；

圖4為供試品圖譜。

具體實施方式

下面通過實施例來進一步闡述本發明，應理解這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。

1、儀器與試藥

1.1儀器：高效液相色譜儀，電子天平，恒溫水浴鍋

1.2試劑：甲醇、磷酸為色譜純，水為純化水，其他試劑為分析純。

1.3對照品：槲皮素，批號(100081-200907)，山柰素，批號(110861-200808)，由中國藥品生物制品檢定所提供；精密稱取槲皮素對照品和山柰素對照品適量，加80％甲醇制成每1ml含10μg和20μg的對照品混合溶液。

1.4供試品：青錢柳藥材，購自福建龍巖地區

對于青錢柳的質量控制標準為：青錢柳中黃酮類化合物以槲皮素與山柰素的總量計，每1g不得少于3.4mg。

2、色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.4％磷酸溶液(體積比60∶40)為流動相；檢測波長為360nm；流速為1.0ml/min；理論板數按槲皮素峰計算應不低于2500；

3、供試品制備方法中提取溶劑的確定試驗：

取本品粉末1.5g，共6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，2份為一組，共3組，3個組分別加入60％甲醇、80％甲醇、甲醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流提取1小時，放冷，再稱定重量，用同濃度甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密吸取續濾液25ml，加鹽酸5ml，90℃水浴回流1小時，取出，迅速冷卻，轉移至50ml量瓶中，用同濃度甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。用上法測得各樣品中槲皮素和山柰素平均總含量，結果見表1

表1：不同溶劑提取的比較試驗