[發明專利]乳腺癌早期診斷試劑盒

在審

• 申請號: 201610045846.6
• 申請日: 2016-01-22
• 公開（公告）號: CN106995837A
• 公開（公告）日: 2017-08-01
• 發明（設計）人: 劉蘇燕;吳詩揚
• 申請（專利權）人: 益善生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司44224
• 代理人: 萬志香

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體的是涉及一種乳腺癌早期診斷試劑盒。

背景技術

乳腺癌是發生在乳腺上皮組織的惡性腫瘤，是女性最常見的惡性腫瘤之一，發病率占全身各種惡性腫瘤的7％～10％，死亡率已經排在女性癌癥死亡率之首。乳腺癌在40-60歲間、絕經期前后的婦女發病率較高，發病率正逐年上升，并且顯示出年輕化的趨勢。目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不會致命，但是由于乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，細胞之間粘著性發生變化，容易脫落。癌細胞一旦脫落，游離的癌細胞便可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉移，危及生命。手術、放療、化療和激素療法對乳腺癌有很高的治療性，這種病在早期階段被檢測到時很多時候是可治愈的。早期乳腺癌的治愈率高，晚期的治愈率低，據國內資料報道，乳腺癌I期的5年生存率在90％～95％以上，II期是70％～80％，III期是50％～60％，而IV期則是10％左右，其治愈率與臨床分期存在顯著相關性。目前對乳腺癌的發病機制尚未完全清楚，因此早期診斷、早期治療對于乳腺癌的防治具有重要意義，是提高療效的關鍵途徑。然而，由于乳腺癌早期診斷檢測技術的限制，多數乳腺癌患者確診時已處于晚期，錯過了最佳的治療時機。

循環腫瘤細胞(circulating tumor cells,CTCs)是因自發或診療操作從實體腫瘤病灶(原發灶、轉移灶)脫落，進入外周血中的各類腫瘤細胞的統稱，目前認為CTCs可能是腫瘤轉移的早期階段。腫瘤細胞侵入到原發腫瘤細胞的周圍組織中，進入血液和淋巴管系統，形成CTCs，并轉運到遠端組織，再滲出，適應新的微環境，最終“播種”、“增殖”、“定植”、形成轉移灶。因此早期發現血液中的CTC，對于癌癥的早期診斷、療效評價、個體化治療和預后判斷都有著重要的指導作用。

目前對于乳腺癌的早期診斷主要依賴于臨床醫學影像(B超、CT、核磁共振成像等)及和其它生化指標的檢測，這些檢測方法都屬于腫瘤形成后診斷。臨床研究早已證實，腫瘤團塊一旦形成，癌細胞通過不同途徑遷移到其它部位克隆生長。雖然也有針對乳腺癌相關腫瘤基因的mRNA早期篩查技術，如RT-PCR、real-time PCR和熒光原位雜交等，但目前的檢測主要基于PCR反應原理，具有易污染、假陽性率高等缺陷，而傳統的RNA熒光原位雜交本身具有 信號靈敏度低的缺點。此外，缺乏特異性的早期診斷分子標志物也是限制乳腺癌早期診斷的重要因素。因此，急需一種針對乳腺癌早期診斷的分子標志物，以及特異性強、靈敏度高的檢測方法，能在基因的一級轉錄功能產物(mRNA水平)上做更精確的早期篩查和診斷。

發明內容

本發明的目的在于提供一種特異性強、靈敏度高的乳腺癌早期診斷試劑盒。

實現上述目的的技術方案如下。

一種乳腺癌早期診斷試劑盒，包括針對檢測目標基因mRNA的捕獲探針、擴增探針和標記探針；所述目標基因包括有乳腺癌篩查基因、和乳腺癌CTC標志基因，所述乳腺癌篩查基因選自MUC1、HER2、hMAM、CEA、COX2中的至少兩種；所述乳腺癌CTC標志基因選自CK19、SERPINE1、EpCAM、hTERT中至少兩種；所述排除基因選自CD45、CD34、CD105、CD144、CD146、VWF中至少兩種；其中，所述捕獲探針連接目標基因mRNA與擴增探針，每條捕獲探針從5’端到3’端的堿基組成依次為：與待檢測的目標基因mRNA結合的特異性序列P1、間隔臂序列、P2序列，所述P2序列為不存在發夾結構，探針內部和探針間不形成二聚體、不存在錯配，與P1、P4和目標基因mRNA之間均不存在特異性結合的序列，針對同一類別目標基因的捕獲探針的P2序列相同；每條擴增探針從5’端到3’端的堿基組成依次為：能與相應捕獲探針的P2序列互補配對的P3序列、間隔臂序列、P4序列；所述P4序列為不存在發夾結構，探針內部和探針間不形成二聚體、不存在錯配、與P1、P2、P3和總mRNA之間均不存在特異性結合的序列；每條標記探針具有與相應擴增探針P4序列互補配對的P5序列，且末端修飾有熒光基團，不同細胞種類目標基因的熒光基團互不相同。

在其中一個實施例中，所述目標基因還包括排除基因mRNA，所述排除基因選自CD45、CD34、CD105、CD144、CD146、VWF中至少兩種