[發(fā)明專利]一種亞細胞結構的特征性N-連接糖鏈及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610044194.4
• 申請日: 2016-01-21
• 公開（公告）號: CN105651853B
• 公開（公告）日: 2018-08-07
• 發(fā)明（設計）人: 楊剛龍;關鋒;黃魯瑜;郭佳
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 耿曉岳

本發(fā)明公開了一種亞細胞結構的特征性N?連接糖鏈及其應用，屬于糖生物學技術領域。本發(fā)明通過膀胱YTS1細胞為實驗材料，使用差速離心的方法獲得了四種亞細胞結構(微粒體、線粒體、細胞核和細胞質)的蛋白質組分，通過聯(lián)合凝集素芯片和質譜(MS)的方法分別鑒定的亞細胞結構蛋白的糖基化修飾類型和結構的變化，顯示亞細胞結構差異性糖鏈的分布。本發(fā)明得到了10種人膀胱YTS1細胞的亞細胞結構的特征性N?連接聚糖；利用特征性N?連接聚糖，可實現(xiàn)對相應亞細胞結構中其他目標物質的間接檢測、定性或者定量檢測。

技術領域

本發(fā)明涉及一種亞細胞結構的特征性N-連接糖鏈及其應用，屬于糖生物學技術領域。

背景技術

糖基化是最重要的一種蛋白質的翻譯后修飾，大約有一半以上的天然蛋白質都被糖基化修飾。蛋白質的糖基化修飾可以促進蛋白質折疊，防止蛋白質被蛋白酶水解，并指導蛋白質運輸。蛋白質的N-糖基化修飾可以調控蛋白質在細胞中的定位、功能、活性、壽命以及蛋白質的多樣性。因此，細胞的糖鏈可以作為細胞生理學新的遺傳密碼。雖然目前糖生物學尚處在早期的研究階段，但是越來越多研究集中在糖基化的結構和功能解析上。

真核細胞中的各種重要形式的糖基化是在內質網(wǎng)和高爾基體內合成的，許多研究亦表明，在細胞核和細胞質中存在著復合的糖綴合物，而且具有及其重要的作用，然而除了個別的描述的比較清楚地特定例子外，還缺乏細胞器中肯定性的糖鏈結構數(shù)據(jù)。目前對亞細胞的研究主要集中在單個蛋白糖基化修飾的解析，無法揭示亞細胞結構整體糖組的特征。

細胞分化和細胞的區(qū)室化使細胞環(huán)境的復雜性增加，有利于細胞適應各種環(huán)境，而理解細胞中每種分子功能對于科學家的挑戰(zhàn)越來越大。通過初步分離和富集大分子物質(蛋白質，聚糖)的策略可以降低儀器檢測中的最小閾值，有助于擴大檢測樣品(血清或組織)中目標分子的檢測范圍。通過該方法分析亞細胞結構中糖蛋白質糖組，可以更全面獲得細胞中所有蛋白質的糖鏈結構。

因此，對細胞中的細胞器糖綴合物分布進行分析、確定更多的聚糖并找到一些亞細胞結構的聚糖標記物，是目前亟需解決的問題。

發(fā)明內容

為了解決上述問題，本發(fā)明通過膀胱YTS1細胞為實驗材料，使用差速離心的方法獲得了四種亞細胞結構(微小體、線粒體、細胞核和細胞質)的蛋白質組分，通過聯(lián)合凝集素芯片和質譜(MS)的方法分別鑒定的亞細胞結構蛋白的糖基化修飾類型和結構的變化，顯示亞細胞結構差異性糖鏈的分布。

本發(fā)明的第一個目的是提供10種亞細胞結構的特征性N-連接聚糖，結構式分別如下：

聚糖1(G1)：1403.481(Fuc)₁(Man)₂+(Man)₃(GlcNAc)₂

聚糖2(G2)：2401.862(Fuc)₁(Neu5Ac)₁(Gal)₁(GlcNAc)₄+(Man)₃(GlcNAc)₂

聚糖3(G3)：2523.909(Fuc)₂(Gal)₃(GlcNAc)₃+(Man)₃(GlcNAc)₂

聚糖4(G4)：1704.608(Gal)₁(GlcNAc)₃+(Man)₃(GlcNAc)₂

聚糖5(G5)：2231.793(Gal)₃(GlcNAc)₄+(Man)₃(GlcNAc)₂