[發明專利]一種呼吸道合胞病毒A/B亞型多重熒光定量PCR檢測引物組和探針組及其試劑盒和制備方法有效
| 申請號： | 201610044078.2 | 申請日： | 2016-01-22 |
| 公開（公告）號： | CN105543414B | 公開（公告）日： | 2019-05-21 |
| 發明（設計）人： | 劉文寬;周榮;許多;邱淑燕 | 申請（專利權）人： | 廣州醫科大學附屬第一醫院 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 趙蕊紅 |
| 地址： | 510120 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 呼吸道 病毒 多重 熒光 定量 pcr 檢測 引物 探針 及其 試劑盒 制備 方法 | ||
1.一種呼吸道合胞病毒A/B亞型多重熒光定量PCR檢測引物組和探針組，其特征在于，所述引物組序列如SEQ ID NO：1-4所示，所述探針組序列如SEQ ID NO：5-6所示。
2.一種呼吸道合胞病毒A/B亞型多重熒光定量PCR檢測試劑盒，包括反應管、反應混合物、引物組和探針組，其特征在于，所述引物組的序列如SEQ ID NO：1-4所示，所述探針組的序列如SEQ ID NO：5-6所示。
3.一種呼吸道合胞病毒A/B亞型多重熒光定量PCR檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，其制備方法包括：
(1)步驟一：制備引物
制備RSV-A、RSV-B的特異性引物及陽性對照beta-actin的特異性引物；
所述RSV-A、RSV-B的特異性引物序列如SEQ ID NO：1-4所示；
所述陽性對照beta-actin的特異性引物序列如SEQ ID NO：7-8所示；
(2)步驟二：制備探針
制備RSV-A、RSV-B的特異性探針及陽性對照beta-actin的特異性探針，其中探針分別采用FAM-BHQ1、Texas red-BHQ2、JOE-BHQ1標記；
所述RSV-A、RSV-B的特異性探針序列如SEQ ID NO：5-6所示；
所述陽性對照beta-actin的特異性探針序列如SEQ ID NO：9所示；
(3)步驟三：制備RT-PCR反應體系
RT-PCR緩沖液：PrimeScript一步法RT-PCR試劑盒中的RT-PCR緩沖液；
引物使用量：7-15pmol；
探針使用量：0.5-5pmol；
上述引物探針緩沖液混合物的配制：18μl/反應
酶混合物：2μl；
模板：5μl；
反應總體積：25μl。
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