[發明專利]一種同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態性的引物及其方法

在審

• 申請號: 201610043853.2
• 申請日: 2016-01-22
• 公開（公告）號: CN105525006A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 梁耀銘;于世輝;趙薇薇;燕啟江;胡昌明;羅錦霞
• 申請（專利權）人: 廣州金域檢測科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙) 11470
• 代理人: 劉曄

1.一種同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態性的引物，其特征在于：包括PCR擴增引物和 SNaPshotPCR引物；所述PCR擴增引物包括：針對MDR1_C1236T的上游引物5’- TCAGTTCCTATATCCTGTGTCTGTGAA-3’和下游引物5’-GCTGGACTGTTGTGCTCTTCC-3’，針對 MDR1_G2677T/A的上游引物5’-CCCATCATTGCAATAGCAGGAGT-3’和下游引物5’- GCATGAAAAAGATTGCTTTGAGGA-3’，針對MDR1_C3435T的上游引物5’- GATGGCAAAGAAATAAAGCGACTG-3’和下游引物5’-ACTCGATGAAGGCATGTATGTTG-3’，針對 CYP19A1_rs4646的上游引物5’-TCAAACTCTTGGCCTCTGCTTT-3’和下游引物5’- TGGCCCATGGCATTTTATAGG-3’；所述SNaPshotPCR引物包括：針對MDR1_C1236T的SNaPshot PCR引物5’-CTCTGCACCTTCAGGTTCAG-3’，針對MDR1_G2677T/A的SNaPshotPCR引物5’- TTTTTTATTTAGTTTGACTCACCTTCCCAG-3’，針對MDR1_C3435T的SNaPshotPCR引物5’- TTTTTTTTTTTTTTTGTTGGCCTCCTTTGCTGCCCTCAC-3’，針對CYP19A1_rs4646的SNaPshotPCR引 物5’-TTTTTTTTTTTTTTTTCTATGGGTTGTCACCAAGCTAGGTGCTATT-3’。

2.根據權利要求1所述的同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態性的引物，其特征在于：所 述PCR擴增引物中MDR1_C1236T、MDR1_G2677T/A、MDR1_C3435T和CYP19A1_rs4646的引物濃 度比為1:1:1:1，所述SNaPshotPCR引物中MDR1_C1236T、MDR1_G2677T/A、MDR1_C3435T和 CYP19A1_rs4646的引物濃度比為1:1:1:1。

3.一種同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態性的方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1提取DNA樣品；

S2以步驟S1提取的DNA樣本為模板，采用權利要求1中所述的PCR擴增引物進行多重PCR 擴增，并對擴增產物進行純化；

S3以步驟S2純化后的PCR擴增產物為模板，采用權利要求1中所述的SNaPshotPCR引物 進行SNaPshotPCR擴增，并對SNaPshotPCR擴增產物進行純化；

S4采用毛細管電泳技術進行檢測，對檢測結果進行分析，確定SNP位點及其基因型。

4.根據權利要求3所述的同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態性的方法，其特征在于：所 述步驟S1中的DNA樣品為EDTA抗凝外周血的DNA樣品。

5.根據權利要求3所述的同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態性的方法，其特征在于：所 述步驟S2中的多重PCR擴增反應條件包括：階段1：98℃3min；階段2：98℃10s；階段3：58℃ 30s；階段4：72℃1min；階段5：返回到階段2，29個循環；階段6：72℃5min；階段7：25℃保 溫。

6.根據權利要求3所述的同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態性的方法，其特征在于：所 述步驟S3中的SNaPshotPCR擴增反應條件包括：階段1：96℃10s；階段2：55℃5s；階段3： 60℃30s；階段4：返回到階段1，25個循環；階段5：4℃保溫。

7.根據權利要求3所述的同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態性的方法，其特征在于：所 述步驟S4中采用GENEMAPPERIDV4.1軟件對檢測結果進行分析。

8.根據權利要求1所述的同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態性的引物在制備檢測MDR1 和CYP19A1基因多態性試劑中的用途。