[發明專利]一種檢測MDR1基因多態性的引物及其方法

在審

• 申請號: 201610043852.8
• 申請日: 2016-01-22
• 公開（公告）號: CN105525005A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 梁耀銘;于世輝;趙薇薇;燕啟江;胡昌明;羅錦霞
• 申請（專利權）人: 廣州金域檢測科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙) 11470
• 代理人: 劉曄

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種檢測MDR1基因多態性的引物及其方 法。

背景技術

多藥耐藥基因(MDR1)編碼P-糖蛋白（P-gp），它是人體藥物轉運中最重要的轉運 體，能主動將疏水性抗腫瘤藥物泵出胞外，從而減少細胞內藥物濃度。幾乎所有的腫瘤，包 括各種實體瘤、白血病、淋巴瘤等均有MDR1表達。

現代研究發現，MDR1基因多態性直接影響P-gp的表達，與抗腫瘤藥物與免疫抑制 劑等多種藥物的代謝動力學有重要關聯。rs1045642（C3435T）、rs1128503(C1236T)和 rs2032582(G2677T/A)是蛋白編碼區最常見的SNP位點，與藥物代謝密切相關。MDR1基因 3435CC/CT型使得MDR1表達增加，增大腫瘤細胞的耐藥性，使蒽環類抗腫瘤藥療效不顯著， 而TT型患者，能較好地吸收化療藥物，使藥物在體內維持相對較高的血藥濃度，對藥物較為 敏感。MDR1基因12外顯子C1236T多態性，與腦膠質瘤替莫唑胺療效相關，1236CC基因型患者 的總生存期優于CT和TT基因型患者。MDR1基因G2677T/A多態性，與紫杉醇的療效相關， 2677GG基因型患者的總生存期差于GA、GT、TT、TA基因型患者。因此，檢測MDR1基因多態性具 有重大的臨床意義。

中國專利CN102816845B公開了一種MDR1的G2677T/A單核苷酸多態性檢測試劑 盒，所述試劑盒包括紅細胞裂解液、DNA提取液、PCR試劑、單鏈純化試劑和測序試劑，可用 于檢測MDR1（G2677T/A）位點是否發生突變。但是，上述檢測方法存在檢測項目單一，靈敏度 低的缺陷，不利于該檢測試劑盒的推廣和應用。

發明內容

為了解決現有技術中檢測MDR1基因多態性的方法存在的缺陷，本發明的目的在于 提供一種檢測MDR1基因多態性的引物及其方法，該引物主要用于檢測MDR1基因的MDR1_ C1236T(SNP:rs1128503)、MDR1_G2677T/A(SNP:rs2032582)、MDR1_C3435T(SNP: rs1045642)三個位點，具有特異性好、靈敏度高、準確性好等優點，為MDR1基因多態性提供 了一種簡單有效的檢測方法。

本發明提供了一種檢測MDR1基因多態性的引物，包括PCR擴增引物和SNaPshot PCR引物；所述PCR擴增引物包括：針對MDR1_C1236T的上游引物5’- TCAGTTCCTATATCCTGTGTCTGTGAA-3’（SEQIDNO.1）和下游引物5’- GCTGGACTGTTGTGCTCTTCC-3’（SEQIDNO.2），針對MDR1_G2677T/A的上游引物5’- CCCATCATTGCAATAGCAGGAGT-3’（SEQIDNO.3）和下游引物5’- GCATGAAAAAGATTGCTTTGAGGA-3’（SEQIDNO.4），針對MDR1_C3435T的上游引物5’- GATGGCAAAGAAATAAAGCGACTG-3’（SEQIDNO.5）和下游引物5’- ACTCGATGAAGGCATGTATGTTG-3’（SEQIDNO.6）；所述SNaPshotPCR引物包括：針對MDR1_ C1236T的SNaPshotPCR引物5’-CTCTGCACCTTCAGGTTCAG-3’（SEQIDNO.7），針對MDR1_ G2677T/A的SNaPshotPCR引物5’-TTTTTTATTTAGTTTGACTCACCTTCCCAG-3’（SEQIDNO.8）， 針對MDR1_C3435T的SNaPshotPCR引物5’-TTTTTTTTTTTTTTTGTTGGCCTCCTTTGCTGCCCTCAC- 3’（SEQIDNO.9）。

進一步地，所述PCR擴增引物中MDR1_C1236T、MDR1_G2677T/A和MDR1_C3435T的引 物濃度比為1:1:1，所述SNaPshotPCR引物中MDR1_C1236T、MDR1_G2677T/A和MDR1_C3435T 的引物濃度比為1:1:1。

另外，本發明提供一種檢測MDR1基因多態性的方法，包括如下步驟：

S1提取DNA樣品；

S2以步驟S1提取的DNA樣本為模板，采用權利要求1中所述的PCR擴增引物進行多重PCR 擴增，并對擴增產物進行純化；