[發(fā)明專利]一種同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態(tài)性的引物與方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610043851.3
• 申請日: 2016-01-22
• 公開（公告）號: CN105525004A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙薇薇;胡昌明;梁耀銘;于世輝;燕啟江;郭周萍
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州金域檢測科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11470
• 代理人: 劉曄

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態(tài) 性的與及其方法。

背景技術(shù)

多藥耐藥基因(MDR1)編碼P-糖蛋白（P-gp），它是人體藥物轉(zhuǎn)運中最重要的轉(zhuǎn)運 體，能主動將疏水性抗腫瘤藥物泵出胞外，從而減少細胞內(nèi)藥物濃度。幾乎所有的腫瘤，包 括各種實體瘤、白血病、淋巴瘤等均有MDR1表達。

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，MDR1基因多態(tài)性直接影響P-gp的表達，與抗腫瘤藥物與免疫抑制 劑等多種藥物的代謝動力學(xué)有重要關(guān)聯(lián)。rs1045642（C3435T）、rs1128503(C1236T)和 rs2032582(G2677T/A)是蛋白編碼區(qū)最常見的SNP位點，與藥物代謝密切相關(guān)。MDR1基因 3435CC/CT型使得MDR1表達增加，增大腫瘤細胞的耐藥性，使蒽環(huán)類抗腫瘤藥療效不顯著， 而TT型患者，能較好地吸收化療藥物，使藥物在體內(nèi)維持相對較高的血藥濃度，對藥物較為 敏感。MDR1基因G2677T/A多態(tài)性，與紫杉醇的療效相關(guān)，2677GG基因型患者的總生存期差于 GA、GT、TT、TA基因型患者。

芳香化酶是細胞色素P450酶超家族成員，編碼基因為CYP19A1，可催化睪酮、雄烯 二酮向雌酮、雌二醇轉(zhuǎn)化，在雌激素生物合成中起最終的限速催化作用。芳香化酶抑制劑 （AIs）通過抑制芳香化酶，使雌激素水平下降，從而消除雌激素對腫瘤生長的刺激作用。絕 經(jīng)后婦女的雌激素主要來源于雄激素前體物質(zhì)在外周組織的芳香化，故該類藥物主要用于 自然絕經(jīng)或人工絕經(jīng)后的乳腺癌患者。阿那曲唑、來曲唑（第三代非甾體類AIs）對芳香化酶 的抑制程度可達99％以上。

臨床研究證實，CYP19A1基因多態(tài)性對芳香化酶抑制劑在乳腺癌的治療效果有著 很大的影響作用。在接受來曲唑治療的絕經(jīng)后激素受體陽性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者，攜帶 CYP19A1基因rs4646G＞T突變患者的的疾病進展時間比正常者明顯延長。因此，CYP19A1 3’-UTRrs4646G＞T是乳腺癌患者接受芳香化酶抑制劑治療療效的有效預(yù)測指標。

因此，檢測MDR1和CYP19A1基因的多態(tài)性，可以有效的預(yù)測絕經(jīng)期晚期乳腺癌患者 接受芳香化酶抑制劑的治療療效；同時還可以預(yù)測多種抗腫瘤藥物與免疫抑制劑療效及不 良反應(yīng)風(fēng)險，具有重要的臨床價值。

中國專利CN102816845B公開了一種MDR1的G2677T/A單核苷酸多態(tài)性檢測試劑 盒，所述試劑盒包括紅細胞裂解液、DNA提取液、PCR試劑、單鏈純化試劑和測序試劑，可用 于檢測MDR1（G2677T/A）位點是否發(fā)生突變。

中國專利CN101781684B公開了CYP19A1基因SNP檢測液相芯片及檢測方法，所述液 相芯片包括有針對CYP19A1基因的SNP位點分別設(shè)計的野生型和突變型特異性ASPE引物，每 種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端的針對目的基因SNP位點的特異性引物序列組成。該檢 測方法檢測特異性好，可以實現(xiàn)多個SNP位點的并行檢測。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種同時檢測MDR1和CYP19A1基因多態(tài)性的引物與方法， 該引物主要用于檢測MDR1基因的MDR1_G2677T/A(SNP:rs2032582)、MDR1_C3435T(SNP: rs1045642)兩個位點和CYP19A1基因c.*161T>G(SNP:rs4646)位點，具有特異性好、靈敏度 高、準確性好等優(yōu)點，為MDR1和CYP19A1基因多態(tài)性提供了一種簡單有效的檢測方法。