[發(fā)明專利]一種食品中砷對人體的生物有效性及毒性的聯(lián)合評價模型在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610043738.5 | 申請日： | 2016-01-22 |
| 公開（公告）號： | CN105624039A | 公開（公告）日： | 2016-06-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 韋燕燕;鄭小曼;顧明華;黎曉峰;沈方科 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西大學 |
| 主分類號： | C12M3/00 | 分類號： | C12M3/00;C12N5/071;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責任公司 45104 | 代理人： | 覃現(xiàn)凱 |
| 地址： | 530004 廣西壯族*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 食品 人體 生物 有效性 毒性 聯(lián)合 評價 模型 | ||
1.一食品中砷對人體的生物有效性及毒性的聯(lián)合評價模型，其特征在于，包括Caco-2細 胞模型、QSG7701肝細胞模型以及由多孔膜分隔成頂側(cè)室和基底側(cè)室的容器，Caco-2細胞培 養(yǎng)在頂側(cè)室中，QSG7701肝細胞培養(yǎng)在基底側(cè)室中。
2.如權(quán)利要求1所述聯(lián)合評價模型，其特征在于，所述頂側(cè)室為Transwell插入式細胞 培養(yǎng)皿，基底側(cè)室為細胞培養(yǎng)板，Transwell插入式細胞培養(yǎng)皿安裝在細胞培養(yǎng)板的培養(yǎng)孔中。
3.如權(quán)利要求1所述聯(lián)合評價模型，其特征在于，所述Caco-2細胞模型是細胞跨膜電 阻值大于等于550Ω·cm2的細胞單層。
4.如權(quán)利要求1所述聯(lián)合評價模型的建立方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)Caco-2細胞培養(yǎng)
將Caco-2細胞培養(yǎng)在六孔板的Transwell插入式細胞培養(yǎng)皿；
(2)QSG7701肝細胞培養(yǎng)
將QSG7701肝細胞培養(yǎng)在另一塊六孔培養(yǎng)板上；
(3)聯(lián)合評價模型的建立；
將載有Caco-2細胞的Transwell插入式細胞培養(yǎng)皿置于培養(yǎng)QSG7701肝細胞的六孔板 之上，即可。
5.如權(quán)利要求4所述聯(lián)合評價模型的建立方法，其特征在于，所述步驟(1)具體為：
a.取Caco-2細胞，復(fù)蘇，將Caco-2細胞單獨培養(yǎng)于25cm2培養(yǎng)瓶中，加入含胎牛血 清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)，其中胎牛血清的體積分數(shù)為10％，按1:2傳代進行傳代培養(yǎng)，
b.將Transwell插入式細胞培養(yǎng)皿放入六孔培養(yǎng)板中，取傳代好的Caco-2的細胞，將1.5mL 密度為3×105個/ml的Caco-2細胞液滴入Transwell插入式細胞培養(yǎng)皿中，同時，在基底側(cè) 室加入2mL含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，其中胎牛血清的體積分數(shù)為10％，然后置于 37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，連續(xù)培養(yǎng)21天，期間每天更換基底側(cè)室中的培養(yǎng)液，得載 有Caco-2細胞的Transwell插入式細胞培養(yǎng)皿。
6.如權(quán)利要求4所述聯(lián)合評價模型的建立方法，其特征在于，所述步驟(2)具體為：
a.取QSG7701細胞，復(fù)蘇，將QSG7701肝細胞單獨培養(yǎng)于25cm2培養(yǎng)瓶中，加入含 胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，其中胎牛血清的體積分數(shù)為10％，按1:3傳代培養(yǎng)，
b.取另一塊六孔培養(yǎng)板，每孔加入2ml密度為1.5×105個/mL傳代培養(yǎng)好的QSG7701 細胞液，并每天換液，培養(yǎng)3～5天，得載有QSG7701肝細胞的細胞培養(yǎng)板。
7.一種利用如權(quán)利要求1所述聯(lián)合評價模型評價食品中砷對人體的生物有效性及毒性的 方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)制備無菌食品待測液；
(2)將無菌食品待測液加入到所述聯(lián)合評價模型的頂側(cè)室的Caco-2細胞層上，將HBSS 溶液作為轉(zhuǎn)運溶液加入到所述聯(lián)合評價模型的基底側(cè)室的QSG7701肝細胞上，再將所述聯(lián)合 評價模型放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
(3)評價指標
a.分別檢測Caco-2細胞、QSG7701肝細胞和轉(zhuǎn)運溶液中的砷含量，根據(jù)檢測結(jié)果評價待 測食品中砷對人體的生物有效性；
b.收集QSG7701肝細胞樣品，采用倒置顯微鏡檢測細胞的形態(tài)學，采用MTT試劑盒檢 測細胞活性，采用丙二醛試劑盒檢測丙二醛含量，根據(jù)檢測結(jié)果評價待測定食品中砷對細胞 的毒性。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(1)具體為：
取待測食品，磨碎，加入pH1.5的胃蛋白酶，在37℃恒溫水浴鍋中消化2h；然后加入 pH5.0的胰酶和膽汁消化液，在37℃恒溫水浴鍋中消化2h；用固體NaHCO3調(diào)節(jié)消化液pH 值為7.0～7.2，離心，收取上清液，上清液經(jīng)0.22μm無菌濾膜過濾，獲取無菌食品待測液。
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