[發明專利]棒曲霉素的檢測方法及檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201610043724.3
• 申請日: 2016-01-24
• 公開（公告）號: CN105543375A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 曾云龍;符方芬;鄧克勤;楊凡;黃昊文;唐春然
• 申請（專利權）人: 湖南科技大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 張家界市慧誠商標專利事務所 43209
• 代理人: 高紅旺

1.一種棒曲霉素的檢測方法，其特征是，該方法包括如下步驟：

（A）棒曲霉素核酸適體Apt與單鏈信號探針ssDNA雜交，形成雜交鏈；

（B）使該雜交鏈與待測樣品作用，當待測樣品中有棒曲霉素存在時，雜交鏈中Apt段選 擇性地與棒曲霉素反應生成Apt-棒曲霉素，同時釋放出單鏈信號探針ssDNA；

（C）消除雜交鏈的干擾，利用DNA擴增，使雜交鏈成雙鏈DNA，然后用外切酶選擇性地催 化雙鏈DNA水解成單核苷酸，體系中單鏈信號探針ssDNA不水解而保留下來；

（D）利用棒曲霉素核酸適體-棒曲霉素結合體不能誘導銀離子還原成近紅外熒光銀納 米簇，只有單鏈信號探針ssDNA能夠誘導銀離子還原生成強熒光的近紅外銀納米簇的原理， 檢測體系熒光強度，從而測定待測樣品中的真菌毒素棒曲霉素的含量。

2.根據權利要求1所述的棒曲霉素的檢測方法，其特征是，所述棒曲霉素核酸適體為 5’-CAGCTCAGAAGCTTGATCCCGGCCCGCCAACCCGCATCATCTACACTGATATTTTACCTT GACTATCAGTCGTGC-3’。

3.根據權利要求1或2所述的棒曲霉素的檢測方法，其特征是，所述的單鏈信號探針 ssDNA為5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACGACTGATAGTC-3’。

4.一種檢測棒曲霉素的試劑盒，其特征是，其至少包括：棒曲霉素核酸適體、單鏈信號 探針DNA、DNA擴增體系、外切酶、銀離子還原檢測體系。

5.根據權利要求4所述的檢測棒曲霉素的試劑盒，其特征是，所述棒曲霉素核酸適體 為5’-CAGCTCAGAAGCTTGATCCCGGCCCGCCAACCCGCATCATCTACACTGATATTTTACCTT GACTATCAGTCGTGC-3’。

6.根據權利要求4所述的檢測棒曲霉素的試劑盒，其特征是，所述的單鏈信號探針DNA 為5’-CCCCCCACACCCGATCCCCCCGCACGACTGATAGTC-3’。

7.根據權利要求4所述的檢測棒曲霉素的試劑盒，其特征是，所述DNA擴增體系包括緩 沖溶液,緩沖溶液由Tris-HCl、MgCl₂和(NH₄)₂SO₄組成，三磷酸脫氧單核苷酸混合溶液 dNTP和Phi29DNA聚合酶。

8.根據權利要求4所述的檢測棒曲霉素的試劑盒，其特征是，所述核酸外切酶為Exo III核酸外切酶。

9.根據權利要求4所述的檢測棒曲霉素的試劑盒，其特征是，所述的銀離子還原檢測體 系中的還原劑為抗壞血酸。