[發明專利]黃曲霉毒素M1的快速檢測方法

在審

• 申請號: 201610043521.4
• 申請日: 2016-01-24
• 公開（公告）號: CN105543374A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 易守軍;林雨歡;鄧克勤;黃昊文;徐合意;唐春然;曾云龍
• 申請（專利權）人: 湖南科技大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 張家界市慧誠商標專利事務所 43209
• 代理人: 高紅旺

1.一種黃曲霉毒素M1的快速檢測方法，其特征是，該方法包括如下步驟：

（A）黃曲霉毒素M1核酸適體Apt與單鏈信號探針ssDNA雜交，形成雜交鏈；

（B）使該雜交鏈與待測樣品作用，當待測樣品中有黃曲霉毒素M1存在時，雜交鏈選擇性 地與黃曲霉毒素M1反應釋放出單鏈信號探針DNA；

（C）消除雜交鏈的干擾，利用DNA擴增，使雜交鏈成雙鏈DNA，然后用外切酶，將雙鏈DNA 水解成單核苷酸，從而除去雙鏈DNA，留下單鏈信號探針ssDNA；

（D）利用黃曲霉毒素M1核酸適體-黃曲霉毒素M1結合體不能誘導銅離子還原成近紅外 熒光銅納米簇，只有單鏈信號探針ssDNA能夠誘導銅離子還原生成強熒光的近紅外銅納米 簇的原理，檢測體系熒光強度，從而測定待測樣品中的真菌毒素黃曲霉毒素M1的含量。

2.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素M1的快速檢測方法，其特征是，所述黃曲霉毒素M1 核酸適體為5′-ACTGCTAGAGATTTTCCACAT-3′。

3.根據權利要求1或2所述的黃曲霉毒素M1的快速檢測方法，其特征是，所述的單鏈信 號探針DNA為5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTATGTGGAAAATCTCTA- 3’。

4.權利要求1所述的黃曲霉毒素M1的快速檢測方法，還包括檢測黃曲霉毒素M1的試劑 盒，其至少包括：黃曲霉毒素M1核酸適體、單鏈信號探針DNA、DNA擴增體系、外切酶、銅離子 還原檢測體系。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征是，所述黃曲霉毒素M1核酸適體為5′- ACTGCTAGAGATTTTCCACAT-3′。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征是，所述的單鏈信號探針DNA為5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTATGTGGAAAATCTCTA-3’。

7.根據權利要求4中所述的試劑盒，其特征是，所述DNA擴增體系包括緩沖溶液、dNTP 和Phi29DNA聚合酶;所述緩沖溶液由Tris-HCl、MgCl₂、(NH₄)₂SO₄組成。

8.根據權利要求4中所述的試劑盒，其特征是，所述核酸外切酶為ExoIII核酸外切 酶。

9.根據權利要求4中所述的試劑盒，其特征是，所述的銅離子還原檢測體系中的還原劑 為維生素C。