[發(fā)明專利]一種Bim基因缺失熒光定量PCR檢測引物及探針、檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610040898.4
• 申請日: 2016-01-20
• 公開（公告）號: CN105603069A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發(fā)明（設計）人: 鐘明;李香梅
• 申請（專利權）人: 安徽達健醫(yī)學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 濟南圣達知識產(chǎn)權代理有限公司 37221
• 代理人: 張勇

1.一種Bim基因缺失熒光定量PCR檢測引物及探針，正向引物序列為ForwardPrimer： 5’-CAACAAACCCATCAGAACAGACAC-3’、反向引物序列為ReversePrimer:5’- ACAGCCTCTATGGAGAACAGTGATT-3’，熒光探針序列為Taqman-Probe:5’-FAM- CAGACACTGGAACAAA-MGB-3’，熒光探針的5′端標記FAM熒光報告基團，3’端標記MGB熒光淬滅 基團。

2.權利要求1所述引物及探針在制備針對Bim基因缺失突變檢測的試劑盒、芯片或其他 檢測試劑中的應用。

3.一種Bim基因缺失熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括權利要求1所 述檢測引物及探針。

4.根據(jù)權利要求3所述檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒進一步包括陽性對照樣品 A：包含所檢測Bim基因缺失的基因組片斷DNA質粒。

5.一種快速、準確檢測Bim基因缺失的熒光定量PCR試劑盒，該試劑盒包括熒光定量反 應液預混液、熒光定量反應液A、陽性對照樣品A；

熒光定量反應液A：檢測Bim基因缺失的引物和探針序列，正向引物序列為Forward Primer：5’-CAACAAACCCATCAGAACAGACAC-3’、反向引物序列為ReversePrimer:5’- ACAGCCTCTATGGAGAACAGTGATT-3’、熒光探針序列為Taqman-Probe:5’-FAM- CAGACACTGGAACAAA-MGB-3’，熒光探針的5′端標記FAM熒光報告基團，3’端標記MGB熒光淬滅 基團；

陽性對照樣品A：包含所檢測Bim基因缺失的基因組片斷DNA質粒。

6.一種Bim基因缺失突變的檢測方法，包括：

從樣品組織中提取基因組DNA；

利用權利要求1所述引物及探針或權利要求3-5任一項所述試劑盒進行熒光定量PCR反 應；

根據(jù)熒光定量PCR擴增曲線檢測Bim基因缺失突變。

7.根據(jù)權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，樣品組織為臨床組織蠟塊。

8.根據(jù)權利要求6或7所述的檢測方法，其特征在于，熒光定量PCR的條件為:反應體系 為25μL，正、反引物各0.2μL，探針各0.2μL，樣品模板DNA2μL,2×TaqmanuniversalPCR MasterMix15μL,ddH₂O7.4μL，PCR反應條件：95℃預變性30秒；并按95℃5秒，58℃33秒， 擴增反應45個循環(huán)。