[發明專利]紅細胞膜包裹的酸敏感高分子前藥納米遞藥系統的制備方法及用途

在審

• 申請號: 201610040717.8
• 申請日: 2016-01-21
• 公開（公告）號: CN105497912A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發明（設計）人: 王依婷;南麗娟;彭婷;孫磊;周靖娥;肖曄;王華;高獵防;閆志強;王鏡;朱建中;俞磊
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K31/337;A61P35/00
• 代理公司: 上海藍迪專利商標事務所(普通合伙) 31215
• 代理人: 徐筱梅;張翔

技術領域

本發明涉及高分子化學和納米制劑技術領域，具體地說是一種用于抗腫瘤藥物遞送的長 循環酸敏感高分子遞藥系統的制備及用途。

背景技術

化療是最常見的惡性腫瘤治療手段之一，但是統計表明，目前臨床上化療并未導致癌癥患者死亡率的實質性降低。紫杉醇是最有效的化療藥物之一，主要用于治療肺癌、卵巢癌和乳腺癌等。紫杉醇具有聚合和穩定細胞內微管的作用，致使快速分裂的腫瘤細胞在有絲分裂階段被牢牢固定，使微管不再分開，可阻斷細胞于細胞周期之G2與M期，使癌細胞復制受阻斷而死亡。紫杉醇的低水溶性(0.003mg/ml)大大的限制了它在臨床上的應用。目前被批準臨床上使用的紫杉醇制劑有：由聚氧乙烯蓖麻油和乙醇(1:1，v/v)形成的制劑，但聚氧乙烯蓖麻油會導致嚴重的副作用，如過敏反應。二代紫杉醇制劑包括和與相比，二代制劑降低了毒副作用，提高了耐受劑量，顯示出了良好的藥代動力學特性。但是釋藥和體內循環時間較短問題仍然存在，這也是導致紫杉醇二代制劑不理想的原因。

在腫瘤組織中適時、足量釋藥是一個靶向納米遞藥系統發揮效應的關鍵一步。為達到這 一目的，腫瘤微環境響應型遞藥系統在近年來得到很大進步，主要包括pH敏感、溫度敏感、 酶敏感型遞藥系統，這些遞藥系統可改善藥物釋放行為，提高藥效。目前紫杉醇聚合物前藥 已有大量文獻報道，包括PEG-PTX,PGA-PTX,PGGA-PTX。雖然與游離紫杉醇相比這些前 藥顯示出更高的溶解性和腫瘤靶向性，但是仍存在釋藥不充分的問題。如PGG-PTX60小時 體外釋藥僅為10％。為改善這一問題，利用腫瘤組織(pH6-6.5)及腫瘤細胞內涵體與溶酶 體中(<pH5)的低pH值的特征，合成了一種pH敏感的高分子水溶性紫杉醇前藥PGSC-PTX， 顯示出良好的pH敏感性【CN201510051159.0】。

長循環納米遞藥系統由于可以延長藥物全身傳遞時間并更好實現腫瘤的靶向效果而備 受關注。目前最常見的方法是用高親水性物質聚乙二醇(PEG)對納米粒子進行表面修飾， 且已有PEG化的納米遞藥系統上市。但是，有研究發現機體會對PEG化納米載體產生抗PEG 免疫反應，從而激發其被網狀內皮細胞吞噬。由于紅細胞在體內良好的循環特性，有研究者 依據紅細胞膜的結構特點，對納米粒子表面進行模擬紅細胞膜的修飾來達到延長體內循環時 間的目的，但是這種方法需要進行紅細胞膜蛋白鑒別、純化與化學連接等工作，無疑增大了 納米粒的制備難度，且難以使納米載體完全模擬紅細胞膜結構特點。張良方副教授提出利用 紅細胞膜直接包裹納米粒，在保留納米粒功能的同時，賦予納米粒長循環的特性。研究表明， 與PEG化納米粒相比，紅細胞膜包裹納米粒的半衰期延長了2.5倍。此外，由于紅細胞膜的 易獲得性、內源性、低免疫原性等優點，可以大大增加遞藥系統的成藥性。因此，紅細胞膜 包裹技術為增加納米遞藥系統的體內循環時間、提高藥物成藥性和有效性提供了一種簡單實 用的方法。

發明內容

本發明的目的在于針對遞藥系統在體內的長循環、釋藥問題，提供一種紅細胞膜包裹的 載紫杉醇的酸敏感納米遞藥系統RBCm/PGSC-PTX用于腫瘤治療藥物的制備。將該遞藥系 統靜脈注射入血后，紅細胞膜的包裹可保證該遞藥系統在血液中長循環；在腫瘤酸性環境中， PGSC-PTX可加速降解并釋放足量的PTX,殺死腫瘤細胞。該遞藥系統的成功實施將為當前腫 瘤治療提供一種合理化方式。

實現本發明目的的具體技術方案是：

一種紅細胞膜包裹的酸敏感高分子前藥納米遞藥系統的制備方法，該納米遞藥系統由紅 細胞膜包裹酸敏感高分子前藥納米粒構成，其酸敏感高分子前藥為PGSC-PTX，由聚谷氨酸 鈉和羧甲半胱氨酸通過肽鍵連接組成，再與抗癌藥物紫杉醇PTX鍵合形成，其結構如下：

能自組裝形成平均粒徑為50nm的納米粒，并可在酸性環境下釋放藥物PTX；

特點在于，所述納米遞藥系統的制備方法包括：

步驟1：制備紅細胞囊泡：取小鼠全血，離心操作，破膜釋放內含物，得到空紅細胞膜，超 聲得到均一的紅細胞膜囊泡；

步驟2：紅細胞膜囊泡與酸敏感高分子前藥比例為50-70億個︰6-10mg，將酸敏感高分子前 藥與紅細胞膜囊泡混合，在100W，59Hz條件下超聲5min；得到粒徑均一的紅細胞膜包裹的 酸敏感高分子前藥納米粒即所述納米遞藥系統RBCm/PGSC-PTX，通過G50葡聚糖凝膠柱分 離純化；