[發明專利]一種液體深層發酵法生產樺褐孔菌木質纖維素降解酶的工藝

在審

• 申請號: 201610040694.0
• 申請日: 2016-01-20
• 公開（公告）號: CN105624133A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 徐向群
• 申請（專利權）人: 徐向群
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/24;C12N9/08;C12N9/02
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏;趙越劍

1.一種液體深層發酵法生產樺褐孔菌木質纖維素降解酶的工藝，其特征在 于，包括如下步驟：

(1)菌種活化：以樺褐孔菌為菌種，接種至斜面菌種培養基上培養，獲得 活化菌種；

(2)液體菌種培養：將活化菌種轉入液體種子培養基中，搖床培養至對數 期得液體菌種；

(3)液體深層發酵：將液體菌種接入液體深層發酵培養基中發酵培養，液 體菌種與液體深層發酵培養基的體積比為1:8-10，所述液體深層發酵培養 基的配方為：玉米粉2-6g/L，木質纖維素基質40-48g/L，促進劑1.2-1.5g/L， 誘導劑5×10^-5-9×10^-5g/L，蛋白胨2.3-2.5g/L，酵母粉1.2-1.5g/L，KH₂PO₄0.8-1g/L，Na₂HPO₄0.2-0.4g/L，MgSO₄·7H₂O0.5-0.6g/L，pH值6.0；

液體深層發酵的工藝參數為：發酵溫度27-28℃，發酵罐空氣流量 0.5-1.0vvm，發酵罐內部壓力0.1-0.25kg/cm³，攪拌轉速70-150轉/分鐘， 發酵時間3-11天；

(4)樺褐孔菌木質纖維素降解酶制備：發酵結束后，將發酵產物過濾，獲 得發酵液，在發酵液中加硫酸銨至硫酸銨的終濃度為20wt％，離心10-15 分鐘后收集上清液，再往上清液中加入硫酸銨至硫酸銨的終濃度為80wt％， 離心15-25分鐘后收集沉淀，沉淀溶解在醋酸-醋酸鈉緩沖液中，透析，冷 凍干燥。

2.根據權利要求1所述的工藝，其特征在于：步驟(3)中所述木質纖維 素基質選自小麥秸稈、水稻秸稈、玉米秸稈、樺樹枝、椰子殼、山核桃殼、 竹屑、香蕉皮、石榴皮中的一種或幾種。

3.根據權利要求1或2所述的工藝，其特征在于：步驟(3)中所述促進 劑為乙醇、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、曲拉通、3-[(3- 膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸中的一種或幾種。

4.根據權利要求1或2所述的工藝，其特征在于：步驟(3)中所述誘導 劑為沒食子酸、(+)兒茶素、黎蘆醇、2.2-連氮-3-乙苯-二噻唑-6磺酸、硫 酸銅中的一種或幾種。

5.根據權利要求1或2所述的工藝，其特征在于：步驟(4)中醋酸-醋酸 鈉緩沖液的濃度為20-25mmol/L。

6.根據權利要求1所述的工藝，其特征在于：所述斜面菌種培養基的配方 為：麥芽浸膏40g/100mL，蛋白胨4g/100mL，瓊脂10g/100mL，pH值為 5.4-5.6。

7.根據權利要求6所述的工藝，其特征在于：斜面菌種培養基上培養的參 數為：溫度27-28℃，培養200-250小時。

8.根據權利要求1所述的工藝，其特征在于：所述液體種子培養基的配方 為：葡萄糖5g/100mL，蛋白胨0.5g/100mL，酵母浸膏0.1g/100mL，KH₂PO₄0.1g/100mL，MgSO₄0.15g/100mL，CaCl₂0.01g/100mL。

9.根據權利要求8所述的工藝，其特征在于：液體菌種培養的參數為：溫 度27-28℃，培養3.5-4.5d，搖床轉速80-140轉/分鐘。