[發(fā)明專利]一種腸道病毒嵌合病毒樣顆粒疫苗及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610040285.0
• 申請日: 2016-01-21
• 公開（公告）號: CN105462937B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘茲書;霍春玲;楊潔
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號: C12N7/04
• 分類號: C12N7/04;A61K39/125;A61P31/14;G01N33/569;C12N15/41;C12N15/70;C12R1/93
• 代理公司: 武漢科皓知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 常海濤

本發(fā)明公開了一種腸道病毒嵌合病毒樣顆粒疫苗及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的嵌合病毒樣顆粒為基于乙型肝炎病毒核心蛋白的重組腸道病毒多表位嵌合抗原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；編碼該病毒樣顆粒的DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。將SEQ ID NO.2所示DNA片段克隆到大腸桿菌表達(dá)載體中構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒；將重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得工程菌；培養(yǎng)工程菌，經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)和蛋白純化等操作得到腸道病毒嵌合病毒樣顆粒。本發(fā)明的病毒樣顆粒能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，可用于人和易感動物腸道病毒EV71和CA16感染的免疫預(yù)防，用于制備腸道病毒疫苗。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種腸道病毒嵌合病毒樣顆粒疫苗及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)是由腸道病毒感染引起的一種病毒性傳染病，主要感染嬰幼兒。表現(xiàn)為發(fā)熱，手、足、口腔等部位出現(xiàn)皮疹和潰瘍等臨床特征。少數(shù)患者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等重癥并發(fā)癥，導(dǎo)致死亡(Lee etal.,2009；Liu et al.,2014)。手足口病的主要病原體為腸道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)和柯薩奇A16型(Coxsackie A16，CA16)。EV71感染常引發(fā)嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病及并發(fā)癥，CA16主要引起心肌炎和心包炎等疾病(Lee et al.,2009)。近年來，我國HFMD的暴發(fā)流行呈增加態(tài)勢，重癥病例增多，并發(fā)癥的發(fā)生率與病死率增高。目前有效治療HFMD的藥物缺乏，疫苗免疫接種成為預(yù)防HFMD暴發(fā)流行、減少重癥病例和降低死亡率的最有效手段之一。因此，研發(fā)安全有效、能夠預(yù)防EV71和CA16感染的疫苗用于易感人群免疫接種，是防控HFMD爆發(fā)流行、保障兒童健康和生命安全的關(guān)鍵(Cai et al.,2014)。

EV71和CA16均屬于小RNA病毒科、腸道病毒屬成員，兩者具有類似的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性。病毒基因組為單股正鏈RNA，由7400多個(gè)核苷酸組成(Xu et al.,2010)，基因組包含一個(gè)大的開放閱讀框(ORF)，編碼由2194個(gè)氨基酸的多聚蛋白。該多聚蛋白經(jīng)水解產(chǎn)生P1、P2、P3三個(gè)前體蛋白，其中P1進(jìn)一步加工成VP1、VP2、VP3和VP4等四個(gè)衣殼蛋白。在病毒粒子中，VP4包埋在病毒粒子外殼的內(nèi)側(cè)，與病毒核心緊密連接，VP1、VP2和VP3嵌在病毒顆粒表面。VP1、VP2和VP3蛋白中的一些保守氨基酸構(gòu)成的表位能夠誘導(dǎo)與多種亞型EV71發(fā)生反應(yīng)的中和抗體，產(chǎn)生交叉保護(hù)免疫；或通過誘導(dǎo)EV71特異性CD4⁺T細(xì)胞應(yīng)答增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答(Foo et al.,2007b；Wei et al.,2012)；同樣，由CA16 VP1的保守氨基酸表位能夠誘導(dǎo)中和抗體，保護(hù)機(jī)體抵抗CA16感染(Shi et al.,2013)。這些VP蛋白中的保守氨基酸抗原表位是研制手足口病亞單位疫苗預(yù)防EV71和CA16感染的重要靶標(biāo)。