[發(fā)明專利]一種基于唾液中的雌二醇的核酸適配體及檢測(cè)用金標(biāo)試紙條

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610040002.2
• 申請(qǐng)日: 2016-01-21
• 公開（公告）號(hào): CN105572393B
• 公開（公告）日: 2017-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭杉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢慧禹信息科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/115
• 分類號(hào): C12N15/115;G01N33/74;G01N33/558
• 代理公司: 北京匯澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11228
• 代理人: 程殿軍,張瑾

1.一種檢測(cè)雌二醇的金標(biāo)試紙條，其特征在于，在塑料襯板上依次搭接樣品玻璃纖維膜、核酸探針金標(biāo)墊、硝酸纖維膜和吸水玻璃纖維膜，并且硝酸纖維膜上劃有檢測(cè)線和參照線，參照線靠近吸水玻璃纖維膜一端；其中核酸探針金標(biāo)墊上附著表面經(jīng)修飾的膠體金，檢測(cè)線由核酸適配體A溶液劃成，參照線由核酸適配體B溶液劃成；

所述膠體金的表面經(jīng)過活化了巰基的雌二醇的核酸適配體修飾，雌二醇的核酸適配體核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中序列5’端經(jīng)過巰基修飾；

核酸適配體A溶液包括結(jié)合了鏈霉親和素的互補(bǔ)探針A，與雌二醇的核酸適配體互補(bǔ)配對(duì)，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，其中序列5’端經(jīng)過生物素修飾；

核酸適配體B溶液包括結(jié)合了鏈霉親和素的互補(bǔ)探針B，與雌二醇的核酸適配體互補(bǔ)配對(duì)，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，其中序列5’端經(jīng)過生物素修飾。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于，所述膠體金的溶液的制備方法如下：

將醋酸緩沖液和TCEP溶液混合，再向其中加入雌二醇的核酸適配體，進(jìn)行巰基活化反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后向其中加入金納米粒子溶液，震蕩；再加入dATP，25℃震蕩反應(yīng)后靜置30分鐘，再在4℃下靜置6小時(shí)；然后離心，沉淀用磷酸緩沖液溶解即得。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于，所述醋酸緩沖液濃度為0.5M，pH值6.5，用量1μL；所述TCEP溶液的濃度為10mM，用量1.5μL；所述dATP濃度10μM，用量85μL；所述金納米粒子粒徑30～40nm，用量100μL；所述磷酸緩沖液濃度0.01M，pH值7.4，用量520μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于，所述互補(bǔ)探針A溶液制備方法為：將40～80μL 1～10OD值的生物素修飾的互補(bǔ)探針A溶液和200～300μL 1～5mg/mL鏈霉親和素溶液混合后在25℃下靜置1小時(shí)，再向其中加入500～600μL 0.001～1.000M pH值6.0～8.0的磷酸鹽緩沖溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金標(biāo)試紙條，其特征在于，所述互補(bǔ)探針B溶液制備方法為：將40～80μL 1～10OD值的生物素修飾的互補(bǔ)探針B溶液和 200～300μL 1～5mg/mL鏈霉親和素溶液混合后在25℃下靜置1小時(shí)，再向其中加入500～600μL 0.001～1.000M pH值6.0～8.0的磷酸鹽緩沖溶液得到結(jié)合了鏈霉親和素的生物素修飾的互補(bǔ)探針B溶液。

6.權(quán)利要求1～5任一所述的金標(biāo)試紙條的制備方法，其特征在于，將樣品玻璃纖維膜、核酸探針金標(biāo)墊、硝酸纖維膜和吸水玻璃纖維膜依次粘貼到塑料襯板上，相鄰兩粘貼物之間的重疊部分長(zhǎng)度為2mm，干燥封裝，在4℃～25℃條件下保存。