[發明專利]一種雙向梯度血管內皮生長因子的神經導管制備方法

有效

• 申請號: 201610039086.8
• 申請日: 2016-01-12
• 公開（公告）號: CN105617458B
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 羅卓荊;黃景輝;黃亮亮;朱雷;夏冰;孫振
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: A61K38/18
• 分類號: A61K38/18;A61L27/20;A61L27/22;A61L27/50
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1.一種雙向梯度血管內皮生長因子的神經導管制備方法，其特征在于，該雙向梯度血管內皮生長因子的神經導管制備方法包括以下步驟：

步驟一，靜電紡絲PCL導管的制備：將PCL溶于10％的甲醇/氯仿的混合溶液制備靜電紡絲溶液，通過微量注射泵控制電紡溶液的流速，靜電紡絲裝置兩極間電壓設定為20kV，注射器和接收器之間的距離為15cm，應用21-G針形噴嘴，接收器為直徑1.5mm的鋼管，制備PCL導管，在真空干燥箱中干燥，除去殘余溶劑，得到PCL導管；

步驟二，PCL導管雙向梯度氨解：將PCL導管用細鐵絲穿過，彎曲對折垂直放入2ml EP管中，加入200ul，0.1M的乙二胺溶液，反應5min-20min，然后微量注射泵以1ml/h-3ml/h速度向EP管中加入蒸餾水，當浸沒導管后停止加水，繼續反應5min-10min；之后用PBS洗去未反應的乙二胺；得到中央部-NH₂密度高，向兩端-NH₂密度逐漸減低的梯度導管；

步驟三，肝素偶聯反應制備雙向梯度的肝素化導管：將步驟二所得具有雙向梯度-NH₂的PCL導管放入嗎啉乙磺酸緩沖體30min，移除嗎啉乙磺酸，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺/N-羥基丁二酰亞胺/肝素溶液，避光脫色搖床過夜，將肝素共價結合到攜帶氨基的導管上，PBS洗去未結合的肝素，超凈臺晾干，制得具有雙向梯度的肝素化導管；

步驟四，雙向梯度VEGF導管制備：雙向梯度的肝素化導管，放入2mlEP管中，加入2ml100ng/ml的VEGF溶液，4℃浸泡過夜，吸出VEGF溶液，加入PBS溶液潤洗，超凈臺晾干，制得具有雙向梯度的VEGF功能化的導管。

2.如權利要求1所述的雙向梯度血管內皮生長因子的神經導管制備方法，其特征在于，所述步驟一中將PCL溶于10％的甲醇/氯仿的混合溶液中甲醇/氯仿按體積質量比占混合溶液的10％，按體積比甲醇∶氯仿＝1∶5。

3.如權利要求1所述的雙向梯度血管內皮生長因子的神經導管制備方法，其特征在于，所述步驟二中，將1.5cm PCL導管用細鐵絲穿過，彎曲對折垂直放入2ml EP管中，加入200ul，0.1M的乙二胺溶液，反應5min-20min，然后微量注射泵以1ml/h-3ml/h速度向EP管中加入蒸餾水，當浸沒導管后停止加水，繼續反應5min-10min。

4.如權利要求1所述的雙向梯度血管內皮生長因子的神經導管制備方法，其特征在于，所述靜電紡絲PCL導管的制備中將PCL溶于10％的甲醇/氯仿的混合溶液制備靜電紡絲溶液，通過微量注射泵控制電紡溶液的流速為2ml/h-4ml/h。

5.如權利要求1所述的雙向梯度血管內皮生長因子的神經導管制備方法，其特征在于，所述靜電紡絲裝置兩極間電壓設定為20kV，注射器和接收器之間的距離為15cm，應用21-G針形噴嘴，接收器為直徑1.5mm的鋼管，制備內徑為1.5mm，長度為1.5cm的PCL導管，在真空干燥箱中干燥，除去殘余溶劑，得到PCL導管。

6.一種利用權利要求1所述的雙向梯度血管內皮生長因子的神經導管制備方法的PCL導管雙向氨解裝置，其特征在于，該PCL導管雙向氨解裝置包括2ml EP管、細鐵絲、PCL導管和微量注射泵；所述PCL導管設置在內部盛有乙二胺溶液2ml EP管內部，所述細鐵絲穿過PCL導管，所述內部裝有蒸餾水的微量注射泵與2ml EP管連接。

7.如權利要求6所述的PCL導管雙向氨解裝置，其特征在于，所述PCL導管通過彎曲對折垂直設置在2ml EP管內部。