[發明專利]動物淋巴細胞分離液及其制備方法

有效

• 申請號: 201610038667.X
• 申請日: 2016-01-20
• 公開（公告）號: CN105524881B
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 郁慶明;靖志安;田莉;姜強;徐煒華;徐念沁
• 申請（專利權）人: 南京三生生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N5/0781
• 分類號: C12N5/0781;C12N5/0783
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 劉艷艷;董建林

本發明公開了一種動物淋巴細胞分離液，包括以下組分及質量百分比：10%泛影酸鈉，5.2?4.4%的聚蔗糖，0.8?1.6%的非糖基單元的親水性高分子聚合物，聚蔗糖與非糖基單元的親水性高分子聚合物的濃度之和為6%，余量為無熱源的去離子水，總量為100%；所述動物淋巴細胞分離液在20℃下比重為1.077±0.001g/ml。使用泛影酸鈉，替代價格昂貴的泛影葡胺，再和聚蔗糖混合配伍，制備成低成本高效率的動物淋巴細胞分離液，分離效果和泛影葡胺配方一致，生產成本顯著性降低；通過添加非糖基單元的親水性高分子聚合物物質，如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯醇，顯著性縮短上述低成本配方分離淋巴細胞時的細胞成帶時間，同時獲得的淋巴細胞質量顯著性改善，幾乎沒有血小板的污染。

技術領域

本發明涉及一種動物淋巴細胞分離液及其制備方法，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

傳統的動物淋巴細胞分離液是采用泛影葡胺和聚蔗糖進行配置。其原理是依賴聚蔗糖在離心的條件下形成濃度梯度，實現對不同細胞的分離，但因聚蔗糖的粘度非常高，不利于在分離過程中的細胞移動，為改善聚蔗糖的粘度，往往在配方中加入一定量的泛影葡胺，降低粘度，有利于分離過程中細胞的移動。但泛影葡胺的價格非常昂貴，我們嘗試用泛影酸鈉替代泛影葡胺，價格將降低6倍。我們初步試驗結果表明，用泛影酸鈉替代泛影酸葡胺，得到了和泛影酸葡胺類似的分離效果，實現了低成本的淋巴細胞分離液的目的。但同時我們也發現，用泛影酸鈉替代影酸葡胺后，在進行淋巴細胞分離時，離心分離時細胞條帶的形成時間(細胞成帶)明顯延長。

為改善這一不利的因素，我們對配方做進一步改進，嘗試加入其它的非糖基類親水性高分子，和聚蔗糖混合，再加入泛影酸鈉，探索是否可以改善上述泛影酸鈉配方的不利之處。

發明內容

目的：為解決傳統淋巴細胞分離成本高的不利之處，用低成本的泛影葡鈉替代泛影葡胺，得到了分離效果類似的低成本配方，但帶來的不利之處是造成分離時，淋巴細胞成帶時間較長，本發明上述的低成本配方作進一步改進，得到一種低成本動物淋巴細胞分離液，分離效果好，血小板污染少。

技術方案：為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

一種動物淋巴細胞分離液，包括以下組分及質量百分比：10％泛影酸鈉，5.2-4.4％的聚蔗糖，0.8-1.6％的非糖基單元的親水性高分子聚合物，聚蔗糖與非糖基單元的親水性高分子聚合物的濃度之和為6％，余量為無熱源的去離子水，總量為100％；所述動物淋巴細胞分離液在20℃下比重為1.077±0.001g/ml。

所述非糖基單元的親水性高分子聚合物選自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯醇。

作為優選方案，所述的動物淋巴細胞分離液，包括以下組分及質量百分比：10％泛影酸鈉，5.2-4.4％的聚蔗糖，0.8-1.6％的聚乙烯吡咯烷酮，聚蔗糖合和聚乙烯吡咯烷酮的濃度之和為6％，余量為無熱源的去離子水，總量為100％；所述動物淋巴細胞分離液在20℃下比重為1.077±0.001g/ml。

所述的動物淋巴細胞分離液，制備方法包括以下步驟：

1)泛影酸鈉料液，配置方法為：稱取無熱源的泛影酸鈉溶于無熱源的去離子水中，用氫氧化鈉溶液調整pH至6.5-7.5，制成質量分數為20％的泛影酸鈉料液；

2)聚蔗糖料液，配置方法為：稱取無熱源的聚蔗糖加熱溶解于無熱源的去離子水中，以無熱源的去離子水定容，制成聚蔗糖料液；

3)聚乙烯吡咯烷酮料液，配置方法為：稱取無熱源的聚乙烯吡咯烷酮加熱溶解于無熱源的去離子水中，以無熱源的去離子水定容，制成聚乙烯吡咯烷酮料液；

4)按照配方比例，將聚乙烯吡咯烷酮料液加入等體積聚蔗糖料液中，混合均勻，再和泛影酸鈉料液等體積混合均勻，降溫至20℃；比重控制在1.077±0.001g/ml，除菌過濾，即得。