[發明專利]快速檢測低豐度蛋白質的無封閉的蛋白質印跡法有效
| 申請號： | 201610037897.4 | 申請日： | 2016-01-20 |
| 公開（公告）號： | CN105675880B | 公開（公告）日： | 2018-11-27 |
| 發明（設計）人： | 鄧斌;李玲;胡博 | 申請（專利權）人： | 華南師范大學 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京市立方律師事務所 11330 | 代理人： | 劉延喜;王增鑫 |
| 地址： | 510631 廣東省廣州市天河*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 快速 檢測 低豐度 蛋白質 封閉 印跡 | ||
1.一種快速檢測低豐度蛋白質的無封閉的蛋白質印跡法，其特征在于，其包括以下步驟：
(1)使用凝膠將從樣品中提取的總蛋白質進行梯度分離；
(2)將已梯度分離的總蛋白質從凝膠印跡到PVDF膜；
(3)將印跡有所述總蛋白質的PVDF膜浸泡在100％甲醇中，浸泡時間為8～15s；
(4)干燥經100％甲醇處理的所述PVDF膜；
(5)對干燥的PVDF膜中的目標蛋白質進行顯色檢測。
2.如權利要求1所述的快速檢測低豐度蛋白質的無封閉的蛋白質印跡法，其特征在于：所述經100％甲醇處理的PVDF膜的干燥方法為自然晾干。
3.如權利要求2所述的快速檢測低豐度蛋白質的無封閉的蛋白質印跡法，其特征在于：所述晾干時間為10～15mi n。
4.如權利要求2所述的快速檢測低豐度蛋白質的無封閉的蛋白質印跡法，其特征在于：所述PVDF膜放置在濾紙上進行晾干。
5.如權利要求1所述的快速檢測低豐度蛋白質的無封閉的蛋白質印跡法，其特征在于，所述對目標蛋白質的顯色檢測步驟包括：
(5.1)進行目標蛋白質與該目標蛋白質的抗體之間的免疫性結合；
(5.2)進行所述目標蛋白質的抗體與顯色標記物之間的免疫性結合；
(5.3)進行顯色反應并且展示顯色結果。
6.如權利要求5所述的快速檢測低豐度蛋白質的無封閉的蛋白質印跡法，其特征在于，所述步驟(5.1)還包括將未結合的所述目標蛋白質的抗體進行漂洗的步驟：將結合有所述目標蛋白質的抗體的PVDF膜置于含有TBST的洗滌液中漂洗兩次，每次8～15s。
7.如權利要求5所述的快速檢測低豐度蛋白質的無封閉的蛋白質印跡法，其特征在于，所述步驟(5.2)還包括將未結合的所述顯色標記物進行漂洗的步驟：將結合有所述顯色標記物的PVDF膜置于含有TBST的洗滌液中漂洗兩次，每次8～15s。
8.如權利要求1所述的快速檢測低豐度蛋白質的無封閉的蛋白質印跡法，其特征在于：所述樣品來源于植物或動物。
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