[發(fā)明專利]一種適用于現(xiàn)場檢測的可卡因快速定量檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610037309.7
• 申請日: 2016-01-20
• 公開（公告）號: CN105675563B
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉志洪;何夢媛;朱勇;王詩詩;李貞;葛依穎
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州陽普醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 張秋燕

本發(fā)明公開一種適用于現(xiàn)場檢測的可卡因快速定量檢測方法，包括以下步驟：(1)制備紙基檢測裝置：選取紙張作為檢測基底，以疏水壁壘在紙張表面圈定親水檢測區(qū)域，共價偶聯(lián)水溶性上轉(zhuǎn)換熒光納米材料和適配體ACA?1；(2)選取金納米顆粒并在其表面修飾適配體ACA?2，得到AuNPs?ACA?2溶液；(3)AuNPs?ACA?2溶液的濃度優(yōu)化；(4)配制可卡因的標(biāo)準(zhǔn)溶液；(5)繪制可卡因檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線；(6)待測體液中可卡因濃度的測定。本發(fā)明解決了可卡因檢測領(lǐng)域亟待解決的快速定量檢測的問題，實現(xiàn)了體液樣品中可卡因濃度的快速、定量、高靈敏檢測，定量檢測靈敏度可達(dá)0.05μM。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于可卡因快速定量檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于上轉(zhuǎn)換熒光納米材料的快速、定量、高靈敏檢測可卡因的紙基檢測方法。

背景技術(shù)

毒品濫用是目前危害人類最嚴(yán)重的社會問題之一，可卡因是各類毒品中應(yīng)用最廣泛的一種。可卡因濫用會對人體產(chǎn)生很大威脅，使得人類心率加快，呼吸急促，甚至出現(xiàn)震顫、痙攣、驚厥等現(xiàn)象，對人類安全、社會穩(wěn)定和世界和平構(gòu)成巨大威脅。因此，研究新型、靈敏、定量的可卡因檢測方法對于禁毒、毒物檢測、刑事鑒定等具有非常重要的實踐意義和應(yīng)用價值。

目前已報道的傳統(tǒng)可卡因檢測方法有：光學(xué)分析法、電化學(xué)分析法、高效毛細(xì)管電泳法、核磁共振光譜法等，這些傳統(tǒng)檢測方法存在檢測靈敏度不夠、操作復(fù)雜耗時、依賴精密貴重儀器、需專業(yè)人員進(jìn)行操作等缺點，常常不能滿足研究分析和臨床檢測的要求。以單克隆抗體為基礎(chǔ)的現(xiàn)場快速檢測毒品方法應(yīng)用最為廣泛，但該類方法存在一定的局限性，如抗體自身缺陷、抗體制備工作量大、不同來源抗體的非特異性結(jié)合產(chǎn)生假陽性信號等。近年來，以核酸適配體為基礎(chǔ)的毒品現(xiàn)場快速檢測方法得到一定發(fā)展，基于核酸適配體的檢測方法特異性好，靈敏度相對于抗體檢測更高，但目大多數(shù)還局限于實驗室研究階段，不適宜用于現(xiàn)場檢測。

綜上所述，本領(lǐng)域尚缺乏令人滿意的適用于現(xiàn)場檢測的可卡因快速定量檢測方法，因此，迫切需要研制開發(fā)具有靈敏、快速、準(zhǔn)確、特異性好等優(yōu)點的可卡因現(xiàn)場檢測技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供種一種適用于現(xiàn)場檢測的可卡因快速定量檢測方法，可以直接獲得可卡因定量檢測結(jié)果，無需二次檢測。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題提供的技術(shù)方案為：

一種適用于現(xiàn)場檢測的可卡因快速定量檢測方法，包括以下步驟：

(1)制備紙基檢測裝置：選取紙張作為檢測基底，以非水溶性溶劑作為疏水壁壘在紙張表面圈定親水檢測區(qū)域，將水溶性上轉(zhuǎn)換熒光納米材料和單鏈核酸適配體ACA-1共價偶聯(lián)在所述親水檢測區(qū)域，得到紙基檢測裝置；

(2)選取金納米顆粒(AuNPs)并在其表面標(biāo)記單鏈核酸適配體ACA-2，所得產(chǎn)物記作AuNPs-ACA-2，將其分散于緩沖液中，得到AuNPs-ACA-2溶液；

(3)AuNPs-ACA-2溶液的濃度優(yōu)化：分別在步驟(1)所述的紙基檢測裝置的親水檢測區(qū)域中加入體積為V1固定濃度的可卡因溶液和體積為V2不同濃度的AuNPs-ACA-2溶液，反應(yīng)完成后除去未反應(yīng)的AuNPs-ACA-2；將所得反應(yīng)后的紙基檢測裝置干燥后用980nm激光光源激發(fā)，于黑暗條件下拍攝親水檢測區(qū)域的熒光圖像并用軟件讀取熒光圖像中綠光強度F；設(shè)定AuNPs-ACA-2溶液的濃度為0時，所得綠光強度空白樣強度記為F₀，計算不同濃度AuNPs-ACA-2溶液所對應(yīng)的熒光猝滅效率(F₀-F)/F₀，得到熒光猝滅效率最大時所對應(yīng)的AuNPs-ACA-2溶液濃度C；

(4)配制可卡因的標(biāo)準(zhǔn)溶液：用體液配制不同濃度的可卡因溶液，即為可卡因標(biāo)準(zhǔn)溶液；