[發(fā)明專利]腈水解酶突變體、基因、載體、工程菌及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610035695.6
• 申請(qǐng)日: 2016-01-19
• 公開（公告）號(hào): CN105505904B
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛亞平;鄭裕國(guó);焦標(biāo);華登恩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/78
• 分類號(hào): C12N9/78;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/42;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種腈水解酶突變體，其特征在于所述突變體是將SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的第190位絲氨酸突變?yōu)楦拾彼峄蚓彼岖@得的。

2.一種權(quán)利要求1所述腈水解酶突變體的編碼基因。

3.一種由權(quán)利要求2所述編碼基因構(gòu)建的重組載體。

4.一種由權(quán)利要求3所述重組載體轉(zhuǎn)化制備的重組基因工程菌。

5.一種權(quán)利要求1所述腈水解酶突變體在催化扁桃腈制備(R)-扁桃酸中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為：以含腈水解酶突變體編碼基因的重組工程菌經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)后離心獲得的濕菌體用pH7.5、0.1mol/L的Tris-HCl緩沖液懸浮制成的菌懸液為酶源，以外消旋扁桃腈為底物，以pH 4.0-9.0的pH緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)構(gòu)成反應(yīng)體系，在30-70℃、200rpm條件下反應(yīng)，反應(yīng)完全后，獲得含(R)-扁桃酸的混合液，將混合液分離純化，獲得(R)-扁桃酸；所述濕菌體的用量以反應(yīng)體系總體積計(jì)為1-10g/L，所述底物用量以反應(yīng)體系總體積計(jì)為20～100mmol/L。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述濕菌體按如下方法制備：將含腈水解酶突變體編碼基因的重組工程菌接種至含終濃度50μg/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃、150rpm/min振蕩培養(yǎng)10h；培養(yǎng)液以體積濃度2％接種量接種到新鮮的含有終濃度50μg/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃、150rpm/min振蕩培養(yǎng)至菌體OD₆₀₀＝0.6～0.8，加入終濃度0.5mM的IPTG，28℃、150rpm/min誘導(dǎo)培養(yǎng)10h，于4℃、9000rpm/min離心10min，收集濕菌體。