[發明專利]一種鴨IgG單克隆抗體及應用

在審

• 申請號: 201610035541.7
• 申請日: 2016-01-19
• 公開（公告）號: CN105524888A
• 公開（公告）日: 2016-04-27
• 發明（設計）人: 范俊青;但漢并;董曉輝;徐高原;金梅林
• 申請（專利權）人: 武漢科前生物股份有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/42;G01N33/577;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

技術領域

本發明涉及鴨血清的檢測與鑒定技術領域，具體涉及一種鴨IgG單克隆抗體及應用。

背景技術

自2010年春季以來，在我國華東地區產蛋鴨群中爆發了以產蛋下降為特征的鴨的流行 病，并且該病在短時間里迅速傳播至河南、河北、江蘇地區、隨后又傳至安徽、福建、廣東 沿海等主要鴨養殖地區，該病傳播迅猛，主要導致種鴨、產蛋鴨采食量和產蛋率直線下降、 感染程度較重的甚至絕產及死亡，不同地區不同品種的蛋鴨都有發病，只是各個鴨群的發病 率高低不一，同一鴨群的發病率幾乎是百分之百，病死率不等(李玉峰等，2011；滕巧泱等， 2010)。

萬春和等人2010年在某個產蛋急劇下降種鴨場中通過采集病鴨的卵巢，無菌分離到病 毒，經過對病毒提取，克隆測序后，序列分析顯示，分離到的病毒有600750bp序列與黃病毒 科黃病毒屬坦布蘇病毒(TMUV)同源性最高。隨后，蘇敬良等人在河北省白洋淀地區的發 病鴨群中也分離到了相似的病毒，并暫且命名為BYD病毒。對分離到的病毒做遺傳進化分 析顯示該病源與1955年在馬來西亞地區伊蚊體內分離到的坦布蘇病毒(Tembusuvirus)親緣 關系最近，同源性也很高(Yanetal.，2011)。因此在2011年的水禽大會上根據黃病毒的 命名規則最終確定該病毒是黃病毒屬的新成員，將該病名稱統一為“鴨坦布蘇病毒病”，將該 病毒命名為鴨坦布蘇病毒(DuckTembusuvirus，DTMUV)。

目前用于該病的診斷方法主要是進行鴨坦布蘇病毒的分離和鑒定，至少需要5天時間。 針對該病毒的PCR和等溫環介導方法方法靈敏高，但前者需要特殊儀器設備，且兩種方法 都容易因污染核酸而出現假陽性。常規的抗體檢測方法診斷鴨坦布蘇病毒的靈敏度低，非特 異性高。因此，建立靈敏度高、特異性好的抗體檢測方法將對該病的快速診斷具有重要意義， 而由高親合力單克隆抗體制備的酶標二抗是建立抗體檢測方法的前提。因此，申請者以純化 的鴨血清IgG為抗原，獲得了分泌抗鴨血清IgG單克隆抗體的雜交瘤細胞，并利用所分泌 的單克隆抗體，研發了一種鴨坦布蘇病毒ELISA抗體檢測試劑盒，該方法將為鴨坦布蘇病 毒的診斷提供靈敏、特異、且適合批量檢測的檢測手段。

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種鴨IgG單克隆抗體，該單克隆抗體特異性高，而且能 夠大量生產，該單抗能夠特異性識別鴨血清IgG的表面蛋白，特異性好，靈敏度高，為建 立鴨血清IgG相關檢測試劑盒提供基礎。

本發明還有一個目的是在于提供了一種分泌抗鴨IgG單克隆抗體的雜交瘤細胞，申請人 于2016年1月14日將該雜交瘤細胞送至中國典型培養物保藏中心保藏，地址：中國武漢武 漢大學，保藏編號：CCTCCNO：C201608，分類命名：雜交瘤細胞株4C7。

本發明的再一個目的是在于提供了一種鴨IgG單克隆抗體在制備鴨血清抗體檢測試劑 中的應用，以該單抗作為一抗或酶標二抗應用于鴨血清IgG的檢測，檢測量大、敏感性高、 特異性好、結果易于分析判斷。

本發明的最后一個目的是在于提供了一種鴨坦布蘇病毒間接ELISA試劑盒，該試劑盒 使用方便，臨床使用中不需要特殊的儀器設備，大大節約了疾病監測成本。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：

一種分泌鴨IgG單克隆抗體的雜交瘤細胞：

用純化的鴨血清IgG為抗原免疫小鼠，用獲得的免疫鼠脾淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融 合，獲得雜交瘤細胞；進一步用鴨血清IgG為抗原篩選，獲得能穩定分泌高親合力抗鴨IgG 單克隆抗體的雜交瘤細胞。

申請人于2016年1月14日將該雜交瘤細胞送至中國典型培養物保藏中心保藏，地址：中 國武漢武漢大學，保藏編號：CCTCCNO：C201608，分類命名：雜交瘤細胞株4C7。

該雜交瘤細胞株4C7可以在含有20％胎牛血清的1640培養基中以半貼壁方式生長，生長 環境為37℃，5％CO₂的培養箱。該雜交瘤細胞株為渾圓透亮，成簇生長，并能穩定的分泌 鴨血清IgG的單克隆抗體。

一種鴨IgG單克隆抗體在檢測鴨血清抗體中的應用，包括以本發明提供的鴨IgG單克隆 抗體作為檢測抗體制備成的鴨血清抗體檢測試劑盒，或是利用本發明提供的鴨IgG單克隆抗 體檢測鴨血清抗體。